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23640
ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)
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ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #23640

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筛选器：
  1. IF
对过表达突变型人 APP695 的小鼠 Tg2576 脑细胞进行共聚焦免疫荧光分析。将切片用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #23640（红色）、GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #3656（伪彩黄色）、β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #51374（绿色）和 DAPI #4083（蓝色）标记。
使用 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)（伪彩绿色）对用 mM-CSF（20 ng/ml，8 天）分化、经 Lipopolysaccharides (LPS) #14011（50 ng/mL，过夜；左图）处理或经 LPS（50 ng/mL，过夜）处理、接着经 尼日利亚菌素（10 μM，2 小时；右图）处理的小鼠原代骨髓源性巨噬细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色= Hoechst 33342 #4082（DNA 荧光染料）。注意，用 LPS 和尼日利亚菌素刺激后 ASC 转位到炎性小体（白色箭头）。
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23640S		 100 µl （50 次检测）

Bulk & Custom Formulation

支持性数据

反应性 M
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 兔 IgG

应用关键词：

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词：

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合 Alexa Fluor® 647 荧光染料，并对小鼠细胞进行了直接的免疫荧光分析内部检测。该抗体显示的物种交叉反应性预计与非偶联的 ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb #67824 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法（冰冻） 1:50
免疫荧光法（免疫细胞化学） 1:50

保存

保存在 PBS（pH 为 7.2）、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。4°C 保存。切勿分装抗体。避光。切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法（冰冻）

A. 溶液与试剂

注：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS)： (9808) 要制备 1L 1X PBS：添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛：16%，无甲醇，Polysciences 公司生产。（cat# 18814），使用新鲜制剂，小瓶打开后在 4°C 避光保存，同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100)：要配制 10 ml：添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中，混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液： (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100)：要制备 10 ml，添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后，添加 0.1 g BSA (#9998)，并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071)，Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 样品制备 - 冰冻/恒冷箱切片 (IF-F)

  1. 冰冻固定组织进行免疫染色（C 部分）。
  2. 对新鲜未固定的冰冻组织，请立刻按下列步骤固定：

    1. 切片用 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛浸没。

      注意：甲醛有毒性，仅可在通风橱中使用。

    2. 室温下固定切片 15 分钟。
    3. 吸干液体后用 1X PBS 冲洗三次，每次 5 分钟。
    4. 继续进行免疫染色操作（C 部分）。

C. 免疫染色

注意：所有随后的孵育都应当在室温下完成，除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育，以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭标本时，按照产品网页实验步骤中推荐的稀释比例，在抗体稀释缓冲液中配制一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液，加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ，用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果，使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下，可长期保存。

发布​时间 2006 年 11 月

修订时间 2013 年 11 月

实验步骤编号：222

免疫荧光法（免疫细胞化学）

A. 溶液与试剂

若想获得高质量的免疫荧光图片，请使用我们 #12727 Immunofluorescence Application Solutions Kit 中高效且划算的预制试剂。

注：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS)： (9808) 要制备 1L 1X PBS：添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛：16%，无甲醇，Polysciences 公司生产。（cat# 18814），使用新鲜制剂，小瓶打开后在 4°C 避光保存，同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭缓冲液（1X PBS / 5% 正常血清 / 0.3% Triton™ X-100）：要制备 10 ml，添加 0.5 ml 与二抗同一物种来源的正常血清（例如 Normal Goat Serum (#5425)）和 0.5 mL 20X PBS 至 9.0 mL dH2O 中并充分混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液 (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton X-100)：要制备 10 ml，添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后，添加 0.1 g BSA (9998)，并混合。

  5. 建议使用偶联荧光素的抗兔二抗：

  6. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071)，Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意：细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体，随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。

    注意：甲醛有毒性，需在通风橱中使用。

  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸干固定液，用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作（C 部分）。

C. 免疫染色

注意：所有随后的孵育都应当在室温下完成，除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育，以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭时，按产品网页中列出的抗体稀释缓冲液中稀释来制备一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液，加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  6. 用抗体稀释缓冲液将荧光物质标记的二抗稀释后，室温下避光孵育标本 1–2 小时。
  7. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  8. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ，用盖玻片盖住切片。
  9. 要达到最佳效果，使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下，可长期保存。

发布​时间 2006 年 11 月

修订时间 2013 年 11 月

实验步骤编号：24

特异性/灵敏度

ASC/TMS1 (D2W8U) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) 识别内源水平的 ASC 总蛋白。

物种反应性：

小鼠

来源/纯化

使用重组小鼠 ASC 蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

TMS1（甲基化诱导沉默的靶标）/ASC（含有 CARD 且与凋亡相关的斑点样蛋白）（也被称为 PYCARD 和 CARD5）是一个包含一个 N 末端 热蛋白域 (PYD) 和一个 C 末端 半光天冬梅酶募集区域 (CARD) 的 22-kDa 促凋亡蛋白 (1-2)。ASC/TMS1 基因最早被发现在乳腺癌细胞 (2) 中出现异常甲基化和沉默，随后被发现在其他一些癌细胞中沉默，包括卵巢癌 (3)、胶质母细胞瘤 (4)、黑色素瘤 (5)、胃癌 (6)、肺癌 (7) 和前列腺癌 (8)。促凋亡/炎症刺激会诱导 ASC/TMS1 表达 (9)。凋亡期间，ASC/TMS1 从胞质重分布到线粒体，并且结合线粒体 Bax，从而引发细胞色素 c 释放和随后的凋亡 (10)。ASC/TMS1 还被发现是炎症信号转导的一个关键组分，在炎症信号转导中受到促炎性信号刺激时结合并激活 caspase-1 (11)。

有限使用

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