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3656
GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)
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GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #3656

引用 (16)
筛选器：
  1. IF
使用 GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)（红色）和 Neurofilament-L (C28E10) Rabbit mAb #2837（绿色），对正常大鼠小脑细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
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3656S		 100 µl （50 次检测）

Bulk & Custom Formulation

支持性数据

反应性 H M R
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 小鼠 IgG1

应用关键词：

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词：

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体接合 Alexa Fluor® 555荧光染料，并对大鼠小脑细胞进行了直接的免疫荧光内部检测。非偶联抗体 #3670 会与人、小鼠和大鼠 GFAP 蛋白发生反应。CST 预计 GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) 还可识别这些物种中的 GFAP。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法（冰冻） 1:50 - 1:200

保存

保存在 PBS（pH 为 7.2）、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。4°C 保存。切勿分装抗体。避光。切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法（冰冻）

A. 溶液与试剂

注：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS)： (9808) 要制备 1L 1X PBS：添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛：16%，无甲醇，Polysciences 公司生产。（cat# 18814），使用新鲜制剂，小瓶打开后在 4°C 避光保存，同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100)：要配制 10 ml：添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中，混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液： (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100)：要制备 10 ml，添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后，添加 0.1 g BSA (#9998)，并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071)，Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 样品制备 - 冰冻/恒冷箱切片 (IF-F)

  1. 冰冻固定组织进行免疫染色（C 部分）。
  2. 对新鲜未固定的冰冻组织，请立刻按下列步骤固定：

    1. 切片用 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛浸没。

      注意：甲醛有毒性，仅可在通风橱中使用。

    2. 室温下固定切片 15 分钟。
    3. 吸干液体后用 1X PBS 冲洗三次，每次 5 分钟。
    4. 继续进行免疫染色操作（C 部分）。

C. 免疫染色

注意：所有随后的孵育都应当在室温下完成，除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育，以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭标本时，按照产品网页实验步骤中推荐的稀释比例，在抗体稀释缓冲液中配制一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液，加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ，用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果，使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下，可长期保存。

发布​时间 2006 年 11 月

修订时间 2013 年 11 月

实验步骤编号：222

特异性/灵敏度

GFAP (GA5) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) 可检测内源水平的 GFAP 总蛋白。

物种反应性：

人, 小鼠, 大鼠

来源/纯化

使用猪脊髓中提纯的天然 GFAP 对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。该抗体在最合适的条件下偶联 Alexa Fluor® 555，其中 F/P 比值为 2-6。

背景

细胞骨架由三种胞内纤维组成：微丝（肌动蛋白丝）、中间纤丝和微管。中间纤维的主要类型在特定细胞类型中特异性表达，比如：细胞角蛋白（上皮细胞）、胶质细胞中的胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)、结蛋白（骨骼、内脏和某些血管平滑肌细胞）、波形蛋白（间质来源细胞）以及神经丝（神经元）。GFAP 和波形纤维蛋白形成星形胶质细胞中的中间纤丝，并且调节其运动性和形状 (1)。具体而言，波形纤维蛋白纤丝在发育早期阶段存在，而 GFAP 纤丝是分化和成熟的脑星形细胞的特征。因此，GFAP 常用作源自星形细胞的颅内和椎管内肿瘤的标记物 (2)。此外，GFAP 中间纤维也存在于周围神经系统内非髓鞘形成的雪旺氏细胞中 (3)。

有限使用

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