反应性 | H M R |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 190 |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
MW (kDa) | 190 |
应用 | 稀释度 |
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蛋白质印迹法 | 1:1000 |
为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
请勿加入用于检测生物素化蛋白标准品的 Anti-biotin, HRP-linked Antibody。没有必要。Streptavidin-HRP 也将会使生物素化标准品可视化。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:266
人, 小鼠, 大鼠
使用包含人 PDGF 受体 β 蛋白的羧基末端片段的 GST 融合蛋白,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
血小板源性生长因子 (PDGF) 家族蛋白具有许多二硫键连接的二聚同工型(PDGF AA、PDGF AB、PDGF BB、PDGF CC 和 PDGF DD),这些同工型可以特定方式结合两种紧密相关的受体酪氨酸激酶:PDGF 受体 α (PDGFRα) 和 PDGF 受体 β (PDGFRβ)。PDGFRα 和 PDGFRβ 在其两个胞内激酶结构域之间有75%-85% 的序列同源性,而在激酶插入和羧基末端尾区之间的同源性水平较低 (27%-28%) (1)。PDGFRα 同型二聚体可结合所有 PDGF 同工型(包含 PDGF D 的同工型除外)。PDGFRβ 同型二聚体可结合 PDGF BB 和 DD 同工型以及 PDGF AB 异二聚体。异聚体 PDGF 受体 α/β 可结合 PDGF B、C 和 D 同型二聚体以及 PDGF AB 异二聚体 (2)。PDGFRα 和 PDGFRβ 可各自与 EGFR 形成异二聚体,EGFR 也被 PDGF 激活 (3)。不同细胞的受体总数和受体亚基组成有所不同,这可能是因为不同细胞类型对 PDGF 结合的反应有差异 (4)。结合配体会诱导受体二聚化和自磷酸化,随后结合和激活包含细胞浆 SH2 结构域的信号转导分子,如 GRB2、Src、GAP、PI3 激酶、PLCγ 和 NCK。激活的 PDGF 受体会启动许多不同的信号转导通路,从而调控细胞生长、肌动蛋白重组、迁移和分化 (5)。PDGFRβ 激酶插入区域中的 Tyr751 是 PI3 激酶的锚定位点 (6)。PDGFRβ (pTyr751-Val-Pro-Met-Leu) Tyr751 产生的磷酸化五肽可抑制 PI3 激酶 p85 亚基的羧基末端 SH2 结构域与 PDGFRβ 的结合 (7)。PDGFRβ 介导的 PI3 激酶激活也需要 Tyr740 (8)。
探索与本品相关的通路。
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