反应性 | H M R Mk |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
流式细胞术(固定/通透) | 1:50 |
本实验步骤中所需的所有试剂可与我们的 Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 一起高效购买,或使用下文所列的货号单独购买。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注:在您的实验中加入荧光细胞染料(包括活力指示染料、DNA 染料等)时,请参考染料产品网页,了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com,了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。
注:固定前,贴壁细胞或组织应予以解离并处于单细胞悬液中。
注:最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般,1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
注:如果使用全血,则在固定前裂解红细胞并通过离心来洗涤。
注:如果表位被甲醛和/或甲醇破坏,可以在固定前添加靶向 CD 标记物或其他胞外蛋白质的抗体。在固定和透化过程期间,这类抗体将保持与目的靶标结合。但注意,某些荧光团(包括 PE 和 APC)会被甲醇损坏,因此不应在透化前添加。如果您不确定,请进行小规模实验。
注:使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
发布时间 2009 年 7 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 大鼠, 猴
使用与小鼠 Smad2 蛋白的氨基末端附近残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
信号转导分子 SMAD 家族的成员是关键胞内通路的组分,可将 TGF-β 信号从细胞表面传递到胞核。已界定三个不同类别的 SMAD:受体调节的 SMAD (R-SMAD),包括 SMAD1、2、3、5 和 9;常见转导介质 SMAD (co-SMAD)、SMAD4;以及拮抗性或抑制性 SMAD (I-SMAD)、SMAD6 和 7 (1-5)。活化型 I 受体与特异性 R-SMAD 有关,并且可在保守的羧基末端 SSXS 基序上对其进行磷酸化。磷酸化的 R-SMAD 从受体上分离,并与 SMAD4 形成一个异聚复合体,从而启动异聚 SMAD 复合体向胞核的移位。一旦进入胞核,SMAD 就会募集多种 DNA 结合蛋白来调节转录活性 (6-8)。
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