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78226
TIM-3 (D5D5R™) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)
抗体偶联物
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TIM-3 (D5D5R™) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #78226

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使用 TIM-3 (D5D5R™) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) 对 Jurkat 细胞（蓝色）和初级 CD4+ T 细胞（绿色）进行流式细胞分析。
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78226S		 100 µl （50 次检测）

Bulk & Custom Formulation

支持性数据

反应性 H
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 兔 IgG

应用关键词：

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词：

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品说明

这种 Cell Signaling Technology 抗体偶联于 Alexa Fluor® 647 荧光染料，并针对人细胞中直接流式细胞分析接受内部检测。预计这种抗体显示与非偶联 TIM-3 (D5D5R™) XP® Rabbit mAb #45208 相同的物种交叉反应性。

产品使用信息

应用 稀释度
流式细胞术（活性） 1:50

保存

保存在 PBS（pH 为 7.2）、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。4°C 保存。切勿分装抗体。避光。切勿冷冻。

实验步骤

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流式细胞术，针对直接结合抗体的活细胞实验步骤

A. 溶液与试剂

注：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 1 X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS)：要配制 1 L 1X PBS：将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水，混合。
  2. 抗体稀释缓冲液：购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616)，或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来配制 0.5 % BSA PBS 缓冲液。4°C 保存。

注：在您的实验中加入荧光细胞染料（包括活力指示染料、DNA 染料等）时，请参考染料产品网页，了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com，了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。

B. 免疫染色

注：使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

注：如果使用全血，则需裂解红血细胞，并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。

注：人 Fc 受体与兔 IgG 发生交叉反应。当感兴趣的细胞表达高水平的 Fc 受体蛋白（例如，巨噬细胞/单核细胞谱系）时，在用兔抗体进行免疫染色之前，用人 Fc 块预孵育活细胞。

注：最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般，1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

  1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。（通常，每次测定 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。）
  2. 通过离心使细胞沉淀下来，移除上清液。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞，这种一抗按建议的稀释度或如通过滴定所确定那样以抗体稀释缓冲液配制。
  4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光。
  5. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。弃去上清液。重复。
  6. 在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。

发布​时间 2017 年 6 月

修订时间 2022 年 1 月

实验步骤编号：1504

特异性/灵敏度

TIM-3 (D5D5R™) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) 可识别内源水平的 TIM-3 总蛋白。

物种反应性：

人

来源/纯化

使用人 TIM-3 蛋白胞外结构域特异性重组蛋白对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

T 细胞 Ig 和 Mucin 结构域包含分子 (TIMs) 为不同免疫细胞表达的跨膜蛋白家族成员。TIM-3 是 T 细胞激活之后诱导的一种抑制分子 (13 )。TIM-3 在慢性感染和癌症情况时由衰竭 T 细胞表达 (4,5)，而共表达 PD-1 和 TIM-3 的肿瘤浸润性 T 细胞表现出最严重的衰竭表型 (5)。肿瘤浸润性树突细胞 (DCs) 也表达 TIM-3。研究发现，通过降低死亡肿瘤细胞释放的核酸的免疫原性，DCs 中 TIM-3 表达可抑制先天免疫 (6)。研究表明，TIM-3 与 CEACAM-1 的异二聚化对 TIM-3 的抑制功能至关重要，并且 TIM-3 和 CEACAM-1 的共同阻断增强了结直肠癌小鼠模型中的抗肿瘤反应 (7)。另外，在小鼠自身免疫模型中，阻断 TIM-3 可增加疾病严重性 (1)。最后一点，Galectin-9 结合 Th1 细胞表达的 TIM-3 可诱导 T 细胞死亡 (8)。

有限使用

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