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11960
Tri-Methyl-Histone H3 (Lys4) (C42D8) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)
抗体偶联物
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R
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Tri-Methyl-Histone H3 (Lys4) (C42D8) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) #11960

引用 (2)
筛选器：
  1. IF
使用 Tri-Methyl-Histone H3 (Lys4) (C42D8) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)（红色）对 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝用 Alexa Fluor® 488 Phalloidin #8878（绿色）标记。
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11960S		 100 µl （50 次检测）

Bulk & Custom Formulation

支持性数据

反应性 H M R Mk Dm Sc
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 兔 IgG

应用关键词：

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词：

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology 的这种抗体与 Alexa Fluor® 555 荧光染料接合，并经内部测试，可用于人体细胞的直接免疫荧光分析。该抗体显示的物种交叉反应性预计与非偶联的 Tri-Methyl-Histone H3 (Lys4) (C42D8) Rabbit mAb #9751 相同。

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法（免疫细胞化学） 1:50

保存

保存在 PBS（pH 为 7.2）、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。4°C 保存。切勿分装抗体。避光。切勿冷冻。

实验步骤

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免疫荧光法（免疫细胞化学）

A. 溶液与试剂

注：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS)： (9808) 要制备 1L 1X PBS：添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛：16%，无甲醇，Polysciences 公司生产。（cat# 18814），使用新鲜制剂，小瓶打开后在 4°C 避光保存，同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭液 (1X PBS / 5% normal goat serum (#5425) / 0.3% Triton™ X-100)：要配制 10 ml：添加 0.5 ml normal goat serum 和 0.5 ml 20X PBS 到 9.0 ml dH2O 中，混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液： (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100)：要制备 10 ml，添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后，添加 0.1 g BSA (#9998)，并混合。
  5. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071)，Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意：细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体，随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。

    注意：甲醛有毒性，需在通风橱中使用。

  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸干固定液，用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作（C 部分）。

C. 免疫染色

注意：所有随后的孵育都应当在室温下完成，除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育，以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭时，按产品网页中列出的抗体稀释缓冲液中稀释来制备一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液，加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  6. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ，用盖玻片盖住切片。
  7. 要达到最佳效果，使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下，可长期保存。

发布​时间 2006 年 11 月

修订时间 2013 年 11 月

实验步骤编号：182

特异性/灵敏度

Tri-Methyl-Histone H3 (Lys4) (C42D8) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate) 可检测在 Lys4 位点被三甲基化的内源水平的组蛋白 H3。已显示该抗体与 Lys4 位点二甲基化的组蛋白 H3 具有一定的交叉反应性，但是不会与非甲基化或单甲基化的组蛋白 H3 Lys4 发生交叉反应。此外，抗体不与甲基化组蛋白 H3 Lys9、Lys27、Lys36 或甲基化组蛋白 H4 Lys20 发生交叉反应。

物种反应性：

人, 小鼠, 大鼠, 猴, 黑腹果蝇 , 酿酒酵母

Species predicted to react based on 100% sequence homology

非洲爪蟾蜍, 斑马鱼

来源/纯化

使用与 Lys4 三甲基化组蛋白 H3 氨基末端相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

核小体由四个核心组蛋白（H2A、H2B、H3 和 H4）组成，是染色质的主要组成部分。最初被认为可作为 DNA 包装的静态支架的组蛋白现在已被证明是动态蛋白，可进行多种类型的翻译后修饰，包括乙酰化、磷酸化、甲基化和泛素化 (1)。组蛋白甲基化是形成基因组的活跃和非活跃区域的主要决定因素，并且在发育期间基因组的正确编程过程中发挥关键作用 (2,3)。组蛋白 H3 (Arg2, 17, 26) 和 H4 (Arg3) 的精氨酸甲基化可促进转录激活，并由蛋白精氨酸甲基转移酶 (PRMTs) 家族介导，该家族包括辅助激活因子 PRMT1 和 CARM1 (PRMT4) (4)。与此相反，已确定更多样化的组蛋白赖氨酸甲基转移酶，除了其中某个外其余的都含有一个保守催化 SET 结构域，该结构域最初在果蝇 Su(var)3-9、zeste 增强子和 Trithorax 蛋白中得以确认。赖氨酸甲基化主要发生在组蛋白 H3 (Lys4 位点, 9, 27, 36, 79) 和 H4 (Lys20 位点) 中，并已确定与转录激活和沉默有关 (4)。这些赖氨酸残基的甲基化可协调染色质修饰酶的募集，这些酶含有甲基赖氨酸结合模块，例如克罗莫结构域 (HP1, PRC1)、PHD fingers (BPTF, ING2)、tudor 结构域 (53BP1) 和 WD-40 结构域 (WDR5) (5-8)。PADI4、LSD1、JMJD1、JMJD2 和 JHDM1 等组蛋白脱甲基酶的发现表明：甲基化是可逆的表观遗传标记物 (9)。

通路

探索与本品相关的通路。

有限使用

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