| 产品包括 | 数量 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| Chaps Cell Extract Buffer (10X) | 5 ml | ||||
| 30X Reducing Agent (1.25 M DTT) | 250 µl |
产品信息
添加含有调节因子的新鲜培养基，使其对细胞进行处理一段时间。
吸干培养物中的培养基；细胞用 PBS 洗涤 3 次；吸干。刮取细胞放入 PBS 中，并旋转减慢进行沉淀。
添加 Chaps Cell Extract Buffer（1 体积的细胞沉淀物）来裂解细胞。在缓冲液中重悬细胞，冻融三次，并以 14,000 rpm 的转数对裂解物进行离心分离。保留上清液并丢弃沉淀的细胞碎片。
添加 SDS 样品缓冲液，并将样品加热至 95-100°C 5 分钟；放在冰上冷却。
用微量离心机分离 5 分钟。
上样 5 µL 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
CHAPS Cell Extract Buffer (5mL) 1X 浓度：50 mM 管/HCl (pH 6.5)、2 mM EDTA、0.1% Chaps、20 µg/ml 亮抑酶肽、10 µg/ml 抑胃酶肽 A、10 µg/ml 抑肽酶。将 DTT 添加到 5mM.1.25 M (250X) DTT (0.25 mL) 中。
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