查看特别推荐 >>
5872
Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X)
缓冲液与染料
缓冲剂

Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X) #5872

引用 (0)
使用 β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb #8480 对在没有蛋白酶抑制剂(左图)或添加 Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X) #5872(右图)的裂解缓冲液中制备且在 37ºC 下孵育规定时间点的 NIH/3T3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。在没有蛋白酶抑制剂的情况下,在采集后 3 小时内,β-Catenin 信号逐渐减弱,表明蛋白被降解。在有蛋白酶抑制剂混合物的情况下,β-Catenin 降解明显减弱,并且信号在采集后 20 小时仍然存在。
使用 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb #4060(上图)或 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb #4691(下图),对血清饥饿过夜、经 hPDGF-BB #8912(100ng/ml,5 分钟)处理、在没有磷酸酶抑制剂(左图)或添加 Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X) #5872(右图)的裂解缓冲液中制备并在 37ºC 下孵育规定时间点的 NIH/3T3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。在没有磷酸酶抑制剂的情况下,在时间点 0 之后,磷酸化-Akt 信号明显减弱,表明磷酸化在之后的时间点快速消失。在有磷酸酶抑制剂混合物的情况下,磷酸化-Akt 信号在所有监测的时间点中依然被保留着。

产品使用信息

1. 使用前,短暂涡旋 Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X)。

2. 在进行细胞裂解之前,在所需裂解缓冲液中按 1:100 的比例稀释混合物,以获得 1X 的使用浓度。

溶液和试剂

Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X) 为一种特制的多成分混合抑制物,其中的抑肽酶、苯丁抑制素、E64 和亮抑酶肽可抑制多种内源性蛋白酶;而氟化钠、焦磷酸钠、β-甘油磷酸和原钒酸钠,则抑制多种内源性丝氨酸/苏氨酸以及酪氨酸磷酸酶。该混合物不含 EDTA(一种金属蛋白酶抑制剂),它与一些下游应用不相容(即蛋白芯片、2D 电泳等)。如要将 EDTA 用作蛋白酶抑制剂,则可添加到细胞裂解缓冲液中,其终浓度为 5mM。

保存

将未稀释的 100X 混合液储存在 4ºC 的温度下。切勿冷冻。本产品可稳定保存 12 个月。

产品说明

当裂解缓冲液中的稀释终浓度为 1X 时,Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail 可防止总细胞提取物中的内源性蛋白酶和磷酸酶对蛋白的降解和去磷酸化。100X 混合物为透明淡黄色到淡绿色的液体。

背景

动态蛋白磷酸化是许多细胞进程调控所依赖的一种关键细胞信号转导机制。为了研究特定靶蛋白的磷酸化状态,磷酸化的目标残基必须保持完整。当细胞裂解成总细胞提取物时,会发生正常细胞信号转导调节丢失,同时细胞提取物内的磷酸酶会以不受控的方式自由去磷酸化蛋白。磷酸酶抑制剂添加到细胞裂解缓冲液中有助于在发生细胞破碎时保留磷酸化残基。

同样,在制备总细胞提取物时,对正常细胞控制的丧失会导致内源性蛋白酶不受控地降解蛋白。蛋白酶抑制剂添加到细胞裂解缓冲液中有助于保留细胞提取物中的靶蛋白。

有限使用

除非如以 CST 合法授权代表签署的书面形式另行明确同意,否则以下条款适用于 CST、其附属公司或其分销商提供的产品。除非 CST 合法授权代表以书面形式单独接受,否则任何附加于或异于此处所载条款和条件的客户条款和条件均被拒绝且无效。

产品用“仅供研究使用”或类似标示声明标示,并且尚未经 FDA 或其他国外或国内监管实体出于任何目的批准、准许或许可。客户不得出于任何诊断或治疗目的或以任何与产品标示声明相冲突的方式使用任何产品。CST 销售或许可的产品提供给作为最终用户的客户,且仅用于研究和开发用途。出于诊断、预防或治疗目的任何产品使用或出于转售(单独或作为成分)或其他商业目的的任何产品购买都要求来自 CST 的单独许可。客户 (a) 不得向任何第三方出售、许可、出借、捐赠或另行转让或提供任何本公司产品,无论单独或联合其他材料方式,或使用本公司产品制造任何商业产品,(b) 不得复制、修改、逆向工程、反编译、反汇编或另行尝试发现本公司产品的底层结构或技术,或出于开发与 CST 产品或服务竞争的任何产品或服务的目的使用本公司产品,(c) 不得从本公司产品改变或移除任何商标、商品名称、徽标、专利或版权声明或标记,(d) 仅应根据 CST 产品销售条款和任何适用文档使用本公司产品,以及 (e) 应就客户联系本公司产品所用的任何第三方产品或服务而言遵守任何许可、服务条款或类似协议。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
所有其他商标均属各自所有者专有。访问我们的商标信息页面。
To Purchase # 5872S
目录# 规格 价格 库存
5872S
1 ml