产品包括 | 数量(计数) | ||||
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Ac-DEVD-AMC | 1 x 1 mg | ||||
AMC (7-amino-4-methylcoumarin) | 1 x 250 µl | ||||
PathScan® Sandwich ELISA Lysis Buffer (1X) 7018 | 1 x 30 ml | ||||
Caspase Assay Buffer (2x) | 1 x 30 ml | ||||
DTT (Dithiothreitol) 7016 | 1 x 192.8 mg |
产品信息
注意:试剂保存在 -20°C 下时可能会发生沉淀。如有必要,加热试剂到 37°C 以溶解沉淀物。
注:细胞裂解物培养板可保存在 −80°C 下供日后使用。
注:我们建议立即读取培养板,并记录 0 小时处的 RFU 读数。这将有助于确定在孵育结束时 RFU 是否发生明显变化。
注:该实验步骤已经在 384 孔培养板样式中进行了测试,请根据培养板容量按比例调整容量。例如,如果使用 384 小容量培养板,则使用 20 µl 底物溶液 B 和 2.5 µl 裂解物。
注:孵育 1 小时后,我们建议读取培养板。如果信号太弱,则延长孵育时间,以观察信号强度是否发生明显变化。如果未观察到信号强度明显增强,则需要加入更多裂解物。
发布时间 2012 年 10 月
实验步骤编号:74
预期的所有物种
Caspase-3(CPP-32、Apopain、Yama、SCA-1)是细胞凋亡的关键执行者,因为它部分或完全负责许多关键蛋白的蛋白水解剪切,例如核酶聚(ADP-核糖)聚合酶 (PARP) (1)。caspase-3 的激活需要经过其未活化的酶原形式转变为活化的 p17 和 p12 片段的蛋白水解过程。caspase-3 的剪切需要位于 P1 位点的天门冬氨酸残基 (2)。
Caspase-7(CMH-1、Mch3、ICE-LAP3)被发现会主要导致细胞凋亡的执行 (3-6)。与 caspase-3 一样,caspase-7 是一种效应子 caspase ,负责裂解活化下游底物,如 PARP (3,5)。在细胞凋亡期间,caspase-7 通过 Asp23、Asp198 和 Asp206 蛋白水解加工被上游 caspase 激活,从而产生成熟亚基 (3,5)。与 caspase-2 和 -3 相似,caspase-7 在识别序列 DEVD 后优先裂解活化底物 (7)。
探索与本品相关的通路。
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