Cell Proliferation Tracer Kit (Fluorometric, Violet 450) #48444

细胞增殖指示剂试剂盒，（荧光检测，紫罗兰色 450）#48444

注意：以下实验步骤是一种常规标记程序由于细胞类型的差异和培养条件的变化，可能需要优化染料浓度、染色时间和/或染色温度。可能需要较高的染料浓度来跟踪更多的细胞生成，而较低的浓度可能足以跟踪较少的分裂。我们建议使用最低浓度的染料，以产生足够的信号进行检测，因为细胞增殖染料对高浓度的细胞可能会产生毒性。

A. 溶液与试剂

注意：细胞增殖指示剂染料易于水解。因此，DMSO 储备溶液应仅在使用当天制备，而不要进行冷冻/解冻循环。染料只能在染色前立即添加到水性缓冲液中。请勿使用含有 Tris 或其他游离胺的缓冲液。

提供的试剂：

• 细胞增殖指示剂染料，紫罗兰色 450 （#62413S）：通过将一小瓶细胞增殖指示剂染料溶解在20 µL 无水 DMSO 中来制备细胞增殖染料原液。这使储备溶液浓度达到 5 mM。保护染料库存溶液避光。
• 无水 DMSO（#15360S）

其他试剂（未提供）：

• 1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)：要制备 1 L 1X PBS：添加 100 ml 10X PBS (#12528) 到 900 ml 水中混合。

B. 靶细胞标记

1. 离心使细胞沉淀，并吸干上清液。
2. 在包含 1 uM 细胞增殖染料的预热（37°C）PBS（或类似缓冲液）中以 10⁶ 细胞/mL 重悬细胞。对于此步骤和所有后续步骤，请保护细胞免受光照。

   注意：染色可以在含有血清的细胞培养基中进行，但是，与在不含血清或其他蛋白质的缓冲液中进行标记相比，荧光信号降低了5-10倍。

3. 在室温或 37°C 下将细胞孵育 10-15 分钟，以吸收染料。
4. 加入等体积的细胞培养基，并在室温或 37°C 下孵育5分钟以水解游离染料。
5. 通过离心沉淀细胞，然后重悬于等体积的新鲜预热细胞培养基中。
6. 在 37°C 下孵育细胞15-30分钟，以使染料与细胞内蛋白发生反应。
7. 通过离心沉淀细胞，然后重悬于等体积的新鲜预热细胞培养基中。继续进行流式细胞仪分析（步骤9）。或者，将细胞返回培养箱并培养所需的时间，以使细胞分裂。
8. 可选：执行甲醛固定、通透和/或免疫染色。
9. 通过流式细胞仪在适当的通道中进行分析。