查看特别推荐 >>
23833
Senescence β-Galactosidase Activity Assay Kit (Fluorescence, Plate-Based)
细胞检测试剂盒
检测试剂盒

Senescence β-Galactosidase Activity Assay Kit (Fluorescence, Plate-Based) #23833

引用 (0)
未经处理和用 Doxorubicin #5927(200 nM,24小时,然后在新鲜生长培养基中静置 3 天)处理的 HeLa 细胞中的裂解液蛋白浓度与相对荧光单位(RFU)之间的关系已经通过衰老的β-半乳糖苷酶活性检测试剂盒(荧光,基于板)的测定进行了证明。
To Purchase # 23833S
目录# 规格 价格 库存
23833S
1 个试剂盒(100 次测试)

产品包括 数量(计数)
Senescence 1X Cell Lysis Buffer 1 x 25 ml
Senescence 2X Reaction Buffer 1 x 6.5 ml
Senescence Stop Solution 1 x 21 ml
SA-β-Gal Substrate 1 x 4 mg

实验步骤

打印

查看 > 收起 >

衰老β-半乳糖苷酶活性测定试剂盒 - 基于反应板的实验步骤

A. 溶液与试剂

提供的试剂

  1. 1X 衰老细胞裂解缓冲液: (#91029)
  2. 2X 衰老反应缓冲液: (#78494)
  3. SA-β-Gal 底物:(#45954)在 348 µL DMSO 中重新配制小瓶 SA-β-Gal 底物,制成 20X 溶液。从复原之日起,将任何未使用的底物存放在 -20°C 下最多 1 个月。
  4. 衰老 Stop Solution: (#66008)

其他试剂(未提供)

  1. β-巯基乙醇(BME)
  2. DMSO(二甲基亚砜)无菌:(#12611)
  3. PMSF:(#8553) 在 1.0 ml 异丙醇中重新配制 34.84 mg 冻干的 PMSF,制成200 mM 溶液。
  4. Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X): (#5872)
  5. Phosphate Buffered Saline (PBS-20X):(#9808) 要制备 1X 溶液,请向 9.5 mL 去离子水中加入0.5 mL 20X PBS。
  6. 在 C. 部分测试步骤 1 中找到的初始反应的 96 孔板。
  7. 适用于荧光板读取器的 96 孔黑色不透明板。
  8. 荧光板读取器能够读取 360 nm 的激发波长和 465 nm 的发射波长。
  9. BCA Protein Assay Kit: (#7780)
  10. 高速离心机
  11. 试剂 96 孔 24 孔 6 孔 10cm 培养皿
    1X PBS 洗涤液 100 µL 400 µL 1000 µL 1500 µL
    1X 细胞裂解缓冲液 100 µL 400 µL 1000 µL 1500 µL

B. 制备细胞裂解物

注意:在使用该试剂盒开始测定之前,应完成诱导衰老的细胞治疗。确保包括未处理的对照物,以提供荧光的基线测量值以进行比较。

  1. 在组织培养容器中培养目标平板细胞,并在适当条件下进行培养以产生衰老细胞。
  2. 在使用前立即准备 1X 衰老细胞裂解缓冲液; 向溶液中加入适量的蛋白酶抑制剂,例如 1.0 mM PMSF 和蛋白酶/磷酸酶抑制剂混合物。使溶液裂解时,将溶液保持在冰上。请参考提供的表格,根据细胞培养容器的大小计算需要多少体积。
  3. 从装有被分析细胞的容器中吸出培养基。
  4. 用冷的 1X PBS 洗涤细胞一次(正确的体积请参考下表),然后吸出并丢弃洗涤液。
  5. 向细胞中加入冷的 1X 衰老细胞裂解缓冲液(请参阅 B 节“步骤2”)(请参阅表格以获取正确的体积)。在冰上孵育 5 分钟。
  6. 从表面刮下细胞,然后将整个裂解液转移到微量离心管中。上下吸移裂解液几次,以促进裂解过程。
  7. 将装有细胞裂解物的微量离心管放入离心机中,并在 4°C 旋转5分钟(x14000 rpm)。
  8. 将上清液转移到新试管。上清液即为细胞裂解物。按一次性使用分装量贮存在 -80°C。
  9. 可选,通过蛋白质检测来确定每个细胞裂解物样品的总蛋白浓度。

C. 检测程序

2X 分析缓冲液的制备:即将使用前,将 BME 加入终浓度为 10 mM 的 2X 衰老反应缓冲液中。然后用含 10mM BME 的 2X 衰老反应缓冲液将 20XSA-β-Gal 底物稀释至 1X。仅对已分析的孔数(每孔 50 µL)提供足够的溶液。立即使用 2X 分析缓冲液,并正确丢弃任何未使用的溶液。

  1. 将 50 µL 细胞裂解液转移到 96 孔板中。加入 50 µL 新鲜配制的 2X 检测缓冲液。在避光的 37°C 下孵育样品 1-3 小时。
  2. 移出 50 µL 反应混合物,然后转移至 96 孔黑色不透明板中。
  3. 通过向每个孔中加入200 µL 衰老 Stop Solution 来终止反应。
  4. 使用 360nm 的激发波长和 465nm 的发射波长读取荧光读板机上的荧光。要获得最佳读数,则在添加 STOP Solution 分钟内读取平板。

发布​时间 2020 年 8 月

实验步骤编号:2285

产品说明

衰老β-半乳糖苷酶活性测定试剂盒(荧光,基于平板)使用 β-gal 底物 4-甲基伞形酮 β-D-半乳糖吡喃糖苷(4-MUG)检测衰老相关的 β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)活性 。与 β-gal 结合后,4-MUG 水解成荧光产物 4-MU,可以在激发波长为 360 nm 和发射波长为 465 nm下进行测量。荧光强度与样品的 β-gal 水平相关。该定量测定法使用细胞裂解物测定 SA-β-gal 活性。每个试剂盒均提供足够的试剂以 96 孔板中进行多达 100 次测定。

背景

β-半乳糖苷酶(也称 β-gal)是一种必需的水解酶,可催化将含半乳糖的碳水化合物水解为单糖类的过程。β-半乳糖苷类的底物包括乳糖、各种糖蛋白、神经节苷脂 GM1 和乳糖神经酰胺。β-半乳糖苷酶广泛用于分子生物学;例如,在分子克隆期间,分离重组细菌时可在添加 β-gal 底物的情况下,利用细菌 β-半乳糖苷酶基因 (lacZ) 的 α-互补结构来检测重组克隆 (1)。在细胞生物学中,衰老相关的 β-半乳糖苷酶 (SA-β-gal)(定义为 PH 6.0 下的 β-gal 活性)是一个广泛使用的复制性衰老标记物。SA-β-gal 活性最初被认为源于在衰老细胞中呈特异性表达的 β-半乳糖苷酶的唯一同工型 (2),但之后证实源于 β-半乳糖苷酶在内源性溶酶体中的过表达和聚集,并且不是复制性衰老专门需要的 (3)

有限使用

除非如以 CST 合法授权代表签署的书面形式另行明确同意,否则以下条款适用于 CST、其附属公司或其分销商提供的产品。除非 CST 合法授权代表以书面形式单独接受,否则任何附加于或异于此处所载条款和条件的客户条款和条件均被拒绝且无效。

产品用“仅供研究使用”或类似标示声明标示,并且尚未经 FDA 或其他国外或国内监管实体出于任何目的批准、准许或许可。客户不得出于任何诊断或治疗目的或以任何与产品标示声明相冲突的方式使用任何产品。CST 销售或许可的产品提供给作为最终用户的客户,且仅用于研究和开发用途。出于诊断、预防或治疗目的任何产品使用或出于转售(单独或作为成分)或其他商业目的的任何产品购买都要求来自 CST 的单独许可。客户 (a) 不得向任何第三方出售、许可、出借、捐赠或另行转让或提供任何本公司产品,无论单独或联合其他材料方式,或使用本公司产品制造任何商业产品,(b) 不得复制、修改、逆向工程、反编译、反汇编或另行尝试发现本公司产品的底层结构或技术,或出于开发与 CST 产品或服务竞争的任何产品或服务的目的使用本公司产品,(c) 不得从本公司产品改变或移除任何商标、商品名称、徽标、专利或版权声明或标记,(d) 仅应根据 CST 产品销售条款和任何适用文档使用本公司产品,以及 (e) 应就客户联系本公司产品所用的任何第三方产品或服务而言遵守任何许可、服务条款或类似协议。

仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
所有其他商标均属各自所有者专有。访问我们的商标信息页面。