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16359
Digitonin Solution
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Digitonin Solution #16359

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使用 HCT 116 细胞和 Tri-Methyl-Histone H3 (Lys4) (C42D8) Rabbit mAb #9751 进行 CUT&RUN 和 ChIP 实验。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。小图 A 比较了 H3K4me3 在染色体 12 上的富集（上部），而小图 B 则比较了 H3K4me3 已知靶标 GAPDH 基因上的富集（下部）。input通道为 CUT&RUN 中的input样品。
使用 Hela 细胞和 Rpb1 CTD (4H8) Mouse mAb #2629 进行 CUT&RUN 和 ChIP 实验。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。小图 A 比较了 Rpb1 在染色体 12 上的富集（上部），而小图 B 则比较了 Rpb1 已知靶标 GAPDH 基因上的富集（下部）。input通道为 CUT&RUN 中的input样品。
使用 HCT 116 细胞和 CTCF (D31H2) XP® Rabbit mAb #3418 进行 CUT&RUN 和 ChIP 实验。€‚使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。小图 A 比较了 CTCF 在染色体 8 上的富集（上部），而小图 B 则比较了 CTCF 已知靶标 MYC 基因上的富集（下部）。input通道为 CUT&RUN 中的input样品。
CUT&Tag, CUT&RUN, and ChIP-seq assays were performed with NCCIT cells and Tri-Methyl-Histone H3 (Lys27) (C36B11) Rabbit mAb #9733, using the CUT&Tag Assay Kit #77552, the CUT&RUN Assay Kit #86652, or the SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005. DNA libraries were prepared using CUT&Tag Dual Index Primers and PCR Master Mix for Illumina Systems #47415 for CUT&Tag samples and DNA Library Prep Kit for Illumina Systems (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 for ChIP-seq and CUT&RUN samples. The upper panel compares enrichment around HoxA genes, while the lower panel compares enrichment around HoxD genes, both are known target genes of H3K27me3.
CUT&Tag, CUT&RUN, and ChIP-seq assays were performed with MCF7 cells grown in phenol red free medium and 5% charcoal stripped FBS for 4 d, then treated with β-estradiol (10 nM) for 45 min and Estrogen Receptor α (D8H8) Rabbit mAb #8644, using the CUT&Tag Assay Kit #77552, the CUT&RUN Assay Kit #86652, or the SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005. DNA libraries were prepared using CUT&Tag Dual Index Primers and PCR Master Mix for Illumina Systems #47415 for CUT&Tag samples and DNA Library Prep Kit for Illumina Systems (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 for ChIP-seq and CUT&RUN samples. The upper panel compares enrichment of Estrogen Receptor α across chromosome 21, while the lower panel compares enrichment around TFF1, a known target gene of Estrogen Receptor α.
CUT&Tag, CUT&RUN, and ChIP-seq assays were performed with NCCIT cells and JARID2 (D6M9X) Rabbit mAb #13594, using the CUT&Tag Assay Kit #77552, the CUT&RUN Assay Kit #86652, or the SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005. DNA libraries were prepared using CUT&Tag Dual Index Primers and PCR Master Mix for Illumina Systems #47415 for CUT&Tag samples and DNA Library Prep Kit for Illumina Systems (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 for ChIP-seq and CUT&RUN samples. The upper panel compares enrichment around HoxA genes, while the lower panel compares enrichment around HoxD genes, both are known target genes of JARID2.
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产品使用信息

For the CUT&RUN and CUT&Tag assay, we recommend adding 25 μl of Digitonin Solution per 1 ml buffer. 并非所有细胞系都对洋地黄皂苷表现出相同的敏感性，因此可能有必要调整缓冲液中洋地黄皂苷的最终体积，以获得特定细胞系的最佳通透性。可通过合并相等体积的细胞悬浮液和 0.4% 台盼蓝染色检测细胞通透性。最佳细胞通透性将产生 >90% 细胞群染色。

保存

洋地黄皂苷溶液以无核酸酶水溶液供应。储存于 -20°C 的温度下。本产品可稳定保存至少 12 个月。

产品说明

The Digitonin Solution provides enough reagent to support 24 CUT&RUN or CUT&Tag assays. This product is formulated for optimal performance in the CUT&RUN and CUT&Tag assays and each lot is tested and validated using the CUT&RUN Assay Kit #86652 or CUT&Tag Assay Kit #77552. 该产品应在使用前在 90-100°C 下完全解冻5 分钟。请在使用过程中将其保存在冰上，并在实验完成后保存在 -20°C 下。

背景

Like the chromatin immunoprecipitation (ChIP) assay, Cleavage Under Targets and Release Using Nuclease (CUT&RUN) and Cleavage Under Targets and Tagmentation (CUT&Tag) are powerful and versatile techniques used for probing protein-DNA interactions within the natural chromatin context of the cell (1-7). CUT&RUN 提供了一种检测细胞中蛋白-DNA 相互作用的快速、可靠且真正的低细胞数测定法。与 ChIP 实验不同，CUT&RUN 不存在甲醛交联、染色质碎裂和免疫沉淀，使之成为一种使蛋白-DNA 相互作用富集和检测靶基因的更快且更有效的方法。CUT&RUN 可在一天之内完成从活细胞到纯化 DNA 的过程，且经证明每次检测只需使用少至 500-1,000 个细胞 (1,2)。和 ChIP 中碎裂所有细胞染色质不同，CUT&RUN 利用一种染色质抗体靶向消化方法，从而使背景信号比 ChIP 实验低得多。因此，CUT&RUN 仅需 ChIP-seq 检测所需测序深度的 1/10 (1,2)。最后，加入简单的 Spike-in DNA 即可准确定量和标准化靶标蛋白结合，而这是 ChIP 方法无法实现的。This provides for effective normalization of signals between samples and between experiments. CUT&Tag 具有与 CUT&RUN 测定相同的许多优点，因为它为检测细胞中的蛋白质-DNA 相互作用提供了快速、稳健和真正的低细胞数实验步骤。In addition, the CUT&Tag assay adds an in situ adaptor DNA ligation step carried out by the pAG-Tn5 enzyme, in which an adaptor DNA is ligated directly to antibody-targeted chromatin DNA fragments in the cell. 因此，后续 DNA 文库制备远快于且远易于 CUT&RUN 测定法后文库制备，无需体外 DNA 末端修复、A 加尾和接头连接。CUT&Tag works very well for analyzing histone modifications, in addition to mapping some transcription factors and cofactors binding.

有限使用

除非如以 CST 合法授权代表签署的书面形式另行明确同意，否则以下条款适用于 CST、其附属公司或其分销商提供的产品。除非 CST 合法授权代表以书面形式单独接受，否则任何附加于或异于此处所载条款和条件的客户条款和条件均被拒绝且无效。

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仅供研究使用。不得用于诊断流程。
Cell Signaling Technology 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。
SimpleChIP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
所有其他商标均属各自所有者专有。访问我们的商标信息页面。
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16359L		 2.4 ml (2 x 1.2 ml)

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