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CUT&Tag pAG-Tn5 (Loaded)
CUT&Tag 试剂盒和试剂

CUT&Tag pAG-Tn5 (Loaded) #79561

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  1. C&T
图 1. CUT&Tag was performed with HCT 116 cells and Tri-Methyl-Histone H3 (Lys4) (C42D8) Rabbit mAb #9751, using CUT&Tag pAG-Tn5 (Loaded) and CUT&Tag Assay Kit #77552. The DNA library was prepared using CUT&Tag Dual Index Primers and PCR Master Mix for Illumina Systems #47415. 该图显示跨染色体 12(上图)的结合,包括 GAPDH(H3K4me3 的已知靶基因)(下图)。
图 2. CUT&Tag was performed with HCT 116 cells and TCF4/TCF7L2 (C48H11) Rabbit mAb #2569, using CUT&Tag pAG-Tn5 (Loaded) and CUT&Tag Assay Kit #77552. The DNA library was prepared using CUT&Tag Dual Index Primers and PCR Master Mix for Illumina Systems #47415. 该图显示结合作用遍及第 8 号染色体(上图),包括 TCF4 的已知靶标基因 MYC(下图)。
图 3. CUT&Tag was performed with NCCIT cells and JARID2 (D6M9X) Rabbit mAb #13594, using CUT&Tag pAG-Tn5 (Loaded) and CUT&Tag Assay Kit #77552. The DNA library was prepared using CUT&Tag Dual Index Primers and PCR Master Mix for Illumina Systems #47415. 该图显示结合作用遍及 JARID2 的已知靶标基因 HOXA(上图)和 HOXD(下图)。

产品使用信息

Please refer to CUT&Tag Assay Kit #77552 for detailed use of this enzyme in the CUT&Tag assay. After cell permeabilization and primary and secondary antibody binding, resuspend cells in 50 μL of High Salt Digitonin Buffer containing 2 μL of pAG-Tn5 Enzyme (1:25 dilution). Incubate cell samples at room temperature for 1 hour, wash cells with High Salt Digitonin Buffer, and then perform the chromatin tagmentation.

保存

Supplied in 22 mM HEPES pH 7.4, 44 mM NaCl, 44 μM EDTA, 0.4 mM DTT, 0.04% Triton X-100, and 50% glycerol. 储存在 –20°C,请勿分装。本产品可稳定保存 6 个月。

产品说明

CUT&Tag pAG-Tn5 (Loaded) 酶提供足以来支持 50 次 CUT&Tag 测定法的酶。It is a fusion of Protein A and Protein G to Tn5, and is recombinantly produced in E. coli. 这种 pAG-Tn5 已负载以兼容于 Illumina 系统上 NG-测序的接头白寡核苷酸,因此经 CUT&Tag pAG-Tn5 (Loaded) 标签化的基因组 DNA 片段已准备好进行 PCR 扩增和 NG-seq。这种酶兼容于多个物种的抗体,包括兔和小鼠。This enzyme is validated using CUT&Tag Assay Kit #77552.

特异性/灵敏度

物种反应性:

预期的所有物种

背景

类似于使用核酸酶靶向切割和释放 (CUT&RUN) ,靶向切割和标签化 (CUT&Tag) 是一项用于细胞的天然染色质环境内部探测蛋白质-DNA 相互作用的强大技术 (1-3)。CUT&Tag 具有与 CUT&RUN 测定相同的许多优点,因为它为检测细胞中的蛋白质-DNA 相互作用提供了快速、稳健和真正的低细胞数实验步骤。In addition, the CUT&Tag assay adds an in situ adaptor DNA ligation step carried out by the pAG-Tn5 enzyme, in which an adaptor DNA is ligated directly to antibody-targeted chromatin DNA fragments in the cell. 因此,后续 DNA 文库制备远快于且远易于 CUT&RUN 测定法后文库制备,无需体外 DNA 末端修复、A 加尾和接头连接。除了定位某种转录因子和辅因子结合过程外,CUT&Tag 还非常适合分析组蛋白修饰。

有限使用

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