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9768
B Cell Signaling Antibody Sampler Kit
一抗
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B Cell Signaling Antibody Sampler Kit #9768

引用 (5)
Simple Western™ analysis of lysates (0.1 mg/mL) from Ramos cells treated with Anti-Human IgM (12 ug/mL, 10”) using Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1) Rabbit mAb #2710. 虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
Simple Western™ analysis of lysates (0.75 mg/ml) from Ramos + IgM cells using Phospho-PLCγ2 (Tyr759) (E9E9Y) Rabbit mAb #50535. 虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。This experiment was performed under reducing conditions on the Jess™ Simple Western instrument from ProteinSimple, a BioTechne brand, using the 12-230kDa.
使用 CD79A (D1X5C) XP® Rabbit mAb（上）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下），对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1) Rabbit mAb（上）或 Syk Antibody #2712（下），对未经处理或经抗 IgM 处理的 Ramos 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 Phospho-CD19 (Tyr531) Antibody（上）和对照物 CD19 Antibody #3574（下），对未经处理或经抗人 IgM 处理（12 µg/ml，2 分钟）的 Ramos 细胞 SDS 提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 Phospho-BLNK (Tyr96) Antibody 对对照或抗人 IgM 处理（12 µg/ml，2 分钟）的 Ramos 细胞 SDS 提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 Phospho-PLCγ2 (Tyr759) (E9E9Y) Rabbit mAb（上图）、PLCγ2 (E5U4T) Rabbit mAb #55512（中间）或 GAPDH (D16H11) XP® Rabbit mAb #5174（下图）对未处理的 (-) 或已经抗人 IgM 处理（12 μg/ml，10 分钟；+）的 Daudi 细胞的提取物进行蛋白印迹分析。
使用 Phospho-CD79A (Tyr182) Antibody（上）或 CD79A Antibody #3351（下），对未经处理或经抗人 IgM 处理（12 µg/ml，10 分钟）的 Ramos 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 Phospho-Src Family (Tyr416) (D49G4) Rabbit mAb（上）或 Src (36D10) Rabbit mAb #2109（下），对血清饥饿或经人 Platelet-Derived Growth Factor BB hPDGF-BB #8912 处理（100 ng/ml，15 分钟）的 NIH/3T3 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
使用 Phospho-Btk (Tyr23) (D1D2Z) 兔单克隆抗体（上图）或 Btk (D6H5) 兔单克隆抗体 #8547（下图），对血清饥饿过夜之后经载体处理（通道 1）、以抗人 IgM 处理（12 μg/ml，10分钟；通道2）或在抗 IgM 处理前使用 Ibrutinib #16483（1μM，60 分钟）预处理（通道 3）的 Daudi 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 CD79A (D1X5C) XP® Rabbit mAb（上）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下），对未经处理 (-) 或经肽 N-糖苷酶 F 处理 (+) 的 Ramos 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1) Rabbit mAb（绿色），对血清饥饿（过夜；左）或经 IgM 处理（12 ug/ml，2 分钟；右）的 Ramos 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
使用 Phospho-CD79A (Tyr182) Antibody（绿色），对未经处理（左）或 IgM 处理（中）的 Ramos 细胞、Jurkat 细胞（右）进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
使用 Phospho-Btk (Tyr223) (D1D2Z) 兔单克隆抗体，对血清饥饿过夜之后经抗人 IgM（12 ug/ml，10 分钟）处理的 Ramos 细胞的 Phospho-Btk (Tyr223) 进行免疫沉淀。泳道 1 是 10% input，泳道 2 是 兔 (DA1E) 单克隆抗体 IgG XP® 同型对照 #3900，泳道 3 是 Phospho-Btk (Tyr223) (D1D2Z) 兔单克隆抗体 (1:50)，而泳道 4 是 Phospho-Btk (Tyr223) (D1D2Z) 兔单克隆抗体 (1:100)。使用 Phospho-Btk (Tyr223) (D1D2Z) 兔单克隆抗体进行蛋白质印迹分析。Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
使用 CD79A (D1X5C) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人淋巴瘤进行免疫组织化学分析。
使用 Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1) Rabbit mAb 或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）对未经（蓝色）或已经抗 IgM（绿色）处理的 Ramos 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (PE Conjugate) #8885 用作二抗。
使用 Phospho-CD79A (Tyr182) Antibody 对未经处理（蓝色）或经 IgM 处理（绿色）的 Ramos 细胞进行流式细胞分析。
使用 CD79A (D1X5C) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
在对照肽（左）或抗原特异性肽（右）存在的情况下，使用 CD79A (D1X5C) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
图像库
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9768T		 1 个试剂盒（8 x 20 微升）

Bulk & Custom Formulation

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
Phospho-Src Family (Tyr416) (D49G4) Rabbit mAb 6943 20 µl
  • WB
  • IP
 H M R Mk 60 兔 IgG
Phospho-Syk (Tyr525/526) (C87C1) Rabbit mAb 2710 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
 H 72 兔 IgG
Phospho-Btk (Tyr223) (D1D2Z) Rabbit mAb 87457 20 µl
  • WB
  • IP
 H M 78 兔 IgG
Phospho-PLCγ2 (Tyr759) (E9E9Y) Rabbit mAb 50535 20 µl
  • WB
 H 150 兔 IgG
Phospho-BLNK (Tyr96) Antibody 3601 20 µl
  • WB
  • IP
 H 68, 70 兔 
Phospho-CD19 (Tyr531) Antibody 3571 20 µl
  • WB
  • IP
 H 95 兔 
Phospho-CD79A (Tyr182) Antibody 5173 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
 H 45-55 兔 
CD79A (D1X5C) XP® Rabbit mAb 13333 20 µl
  • WB
  • IHC
 H 45-55 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
 Rab 山羊 

产品说明

B Cell Signaling Antibody Sampler Kit 提供一种经济的方法，检测通常与 B 细胞激活相关的关键信号转导蛋白。提供的抗体可检测蛋白水平和磷酸化状态。该试剂盒包含足量的一抗和二抗，可进行 2 次迷你蛋白质印迹实验。

特异性/灵敏度

试剂盒包含的所有抗体，可检测各自靶蛋白的内源水平。

来源/纯化

使用合成肽对动物进行免疫接种来产生多克隆抗体，该抗体可采用蛋白 A 和肽亲和力色谱进行纯化。使用人重组蛋白或合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

在 B 细胞表面发现的抗原受体，包含一种由 CD79A 和 CD79B（也分别称 Ig α 和 Ig ß）构成的异二聚体信号转导组分。此受体复合体的存在对 B 细胞发育和功能至关重要。抗原结合先于 CD79A 和 CD79B 异二聚体的形成、后续受体相关激酶的激活。小鼠 CD79A 的 Tyr182（对应人 CD79A 的 Tyr188）是 CD79A 免疫受体酪氨酸激活基序 (ITAM) 中两个关键酪氨酸残基中的一个，酪氨酸残基被 Src 家族激酶（如 Lyn 和 Blk）磷酸化，并在免疫受体激活后的信号转导调节中发挥关键作用。

Syk 是一种在造血细胞胞内信号转导中起重要作用的蛋白酪氨酸激酶 (1-3)。Syk 能够与免疫受体胞浆域的免疫受体酪氨酸激活基序 (ITAMs) 相互作用 (4)。它能偶联激活的免疫受体进行下游信号转导活动，介导各种细胞反应，包括细胞增殖、分化、吞噬 (4)。还有证据表明，Syk 在非免疫细胞中起作用，并且 Syk 还是人乳腺癌的潜在抑癌基因 (5)。酪氨酸 525 和 526 位于 Syk 激酶结构域的激活环中，人 Syk 的 Tyr525/526（相当于小鼠 Syk 的 Tyr519/520）磷酸化对于 Syk 功能不可或缺 (6)。

Lyn 是 Src 家族的一员，主要在造血细胞中表达 (7)。已有报道，两个酪氨酸残基在 Src 家族中的蛋白酪氨酸激酶调节中发挥了非常重要的作用。位于催化区域的 Tyr396 位点（等同于 Src 的 Tyr416 位点 ）的自磷酸化，与酶的激活有关。Csk 介导的羧基末端 Tyr507 位点（等同于 Src 的 Tyr527 位点）磷酸化能使激酶失活。酪氨酸磷酸化和 Lyn 的激活与细胞表面受体（例如，B cell Ag 受体 (BCR) 和 CD40 有关 (8-10)

Bruton 酪氨酸激酶 (Btk) 是细胞质酪氨酸激酶 Btk/Tec 家族的成员。Btk 在 B 细胞发育中发挥重要作用 (11,12)。各种配体激活 B 细胞的同时，Btk 膜转位受到其 PH 结构域与磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸结合的介导 (13-15)。位于膜的 Btk 被激活，且与两个酪氨酸残基 Tyr551 和 Tyr223 的瞬时磷酸化有关。激活环中的 Tyr551 被 Src 家族酪氨酸激酶反式磷酸化，导致 SH3 结构域内 Tyr223 发生自磷酸化，对完全激活必不可少 (16,17)。

CD19 是一个分子量为95 kDa 的共受体，能在 B 细胞中放大信号转导级联 (18)。在 B 细胞表面，CD19 结合 CD21、CD81 和 Leu-13 并发挥作用。CD19 的胞浆尾区有 9 个保守的酪氨酸残基，残基因将信号转导分子与受体偶联，在 CD19 介导的功能中发挥关键作用 (18)。BCR 或 CD19 连结后，CD19 的 Tyr531 和 Tyr500 位点被逐渐磷酸化。此磷酸化会使 PI3 激酶和 Src 家族的酪氨酸激酶偶联到 CD19 并激活 PI3K 和 Src 信号转导通路 (19,20)。

B 细胞连接蛋白 (BLNK) 也称 SLP-65 或 BASH，是一个接头蛋白分子，在 B 细胞激活和 B 细胞抗原受体 (BCR) 结合中发挥重要作用。BLNK 在 BCR 相关 Syk 和下游信号转导级联中发挥作用

磷酸肌醇特异性磷脂酶 C (PLC) 在跨膜信号转导中扮演重要角色。PLC γ2 参与 B 细胞的抗原依赖性信号转导。Btk 或 L 在酪氨酸 753、759、1197 和 1217 位点的磷酸化，与 PLC γ2 活性相关。

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  6. Zhang, J. et al. (2000) J Biol Chem 275, 35442-7.
  7. Yamanashi, Y. et al. (1989) Proc Natl Acad Sci U S A 86, 6538-42.
  8. Yamanashi, Y. et al. (1991) Science 251, 192-4.
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  19. Buhl, A.M. and Cambier, J.C. (1999) J Immunol 162, 4438-46.
  20. Fujimoto, M. et al. (2000) Immunity 13, 47-57.

通路

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