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80366
CD16/CD32 (2.4G2) Rat mAb (IF Formulated)
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CD16/CD32 (2.4G2) Rat mAb (IF Formulated) #80366

引用 (3)
筛选器：
  1. IF
使用 CD16/CD32 (2.4G2) Rat mAb (IF Formulated)（绿色）、GFAP (GA5) Mouse mAb #3670（红色）和 β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb #8243（青色）对野生型小鼠大脑（左图）或阿尔茨海默病淀粉样蛋白小鼠模型的大脑（右图）进行共聚焦免疫荧光平铺扫描。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封片。插图 A 在后续结果图中以更高分辨率显示。
插图 A：使用 CD16/CD32 (2.4G2) Rat mAb (IF Formulated)（绿色）、GFAP (GA5) Mouse mAb #3670（红色）和 β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb #8243（青色）对野生型小鼠大脑（左图）或阿尔茨海默病淀粉样蛋白小鼠模型的大脑（右图）进行分析。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封片。
使用 CD16/CD32 (2.4G2) Rat mAb (IF Formulated)（绿色）对 J774A.1 细胞（左图，高表达）、RAW 264.7 细胞（中间，低表达）或 Neuro-2a 细胞（右图，阴性）进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白微丝由 DyLight™ 554 Phalloidin #13054（红色）标记。样本用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封片。
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Carrier-Free Bulk & Custom Formulation

支持性数据

反应性 M
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 Rat IgG2b

应用关键词：

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词：

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法（冰冻） 1:50 - 1:100
免疫荧光法（免疫细胞化学） 1:50 - 1:100

保存

保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。-20℃ 保存。切勿分装抗体。该产品在 -20C 下可稳定保存 60 个月。

实验步骤

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免疫荧光法（冰冻）

A. 溶液与试剂

注：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS)： (9808) 要制备 1L 1X PBS：添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛：16%，无甲醇，Polysciences 公司生产。（cat# 18814），使用新鲜制剂，小瓶打开后在 4°C 避光保存，同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭缓冲液：（1X PBS / 5% 常规血清/ 0.3% Triton™ X-100）：要制备 10 ml，添加 0.5 ml 与二抗同一物种来源的正常血清（例如 Normal Goat Serum (#5425) 添加至 9.5 ml 1X PBS）并充分混合。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液： (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100)：要制备 10 ml，添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后，添加 0.1 g BSA (#9998)，并混合。

  5. 建议的荧光染料标记抗大鼠二抗：

  6. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071)，Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 样品制备 - 冰冻/恒冷箱切片 (IF-F)

  1. 冰冻固定组织进行免疫染色（C 部分）。
  2. 对新鲜未固定的冰冻组织，请立刻按下列步骤固定：

    1. 切片用 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛浸没。

      注意：甲醛有毒性，仅可在通风橱中使用。

    2. 室温下固定切片 15 分钟。
    3. 吸干液体后用 1X PBS 冲洗三次，每次 5 分钟。
    4. 继续进行免疫染色操作（C 部分）。

C. 免疫染色

注意：所有随后的孵育都应当在室温下完成，除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育，以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭标本时，按照产品网页实验步骤中推荐的稀释比例，在抗体稀释缓冲液中配制一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液，加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  6. 用抗体稀释缓冲液将荧光物质标记的二抗稀释后，室温下避光孵育标本 1–2 小时。
  7. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  8. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ，用盖玻片盖住切片。
  9. 要达到最佳效果，使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下，可长期保存。

发布​时间 2006 年 11 月

修订时间 2016 年 7 月

实验步骤编号：152

免疫荧光法（免疫细胞化学）

A. 溶液与试剂

注：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS)： (9808) 要制备 1L 1X PBS：添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛：16%，无甲醇，Polysciences 公司生产。（cat# 18814），使用新鲜制剂，小瓶打开后在 4°C 避光保存，同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭缓冲液（1X PBS / 5% 正常血清 / 0.3% Triton™ X-100）：要制备 10 ml，将 0.5 ml 与二抗同一物种来源的正常血清（如 Normal Goat Serum (#5425)添加至 9 ml 1X PBS） 并充分混匀。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液 (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100)：要制备 10 ml，将 30 µl Triton™ X-100 添加至 10 ml 1X PBS 。充分混合后，添加 0.1 g BSA (9998)，并混合。

  5. 建议的荧光染料标记抗大鼠二抗：

  6. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071)，Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 标本制备 - 培养细胞系 (IF-IC)

注意：细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。

  1. 吸干液体，随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。

    注意：甲醛有毒性，需在通风橱中使用。

  2. 室温下固定细胞 15 分钟。
  3. 吸干固定液，用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  4. 继续进行免疫染色操作（C 部分）。

C. 免疫染色

注意：所有随后的孵育都应当在室温下完成，除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育，以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭时，按产品网页中列出的抗体稀释缓冲液中稀释来制备一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液，加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  6. 用抗体稀释缓冲液将荧光物质标记的二抗稀释后，室温下避光孵育标本 1–2 小时。
  7. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  8. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ，用盖玻片盖住切片。
  9. 要达到最佳效果，使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下，可长期保存。

发布​时间 2006 年 11 月

修订时间 2013 年 11 月

实验步骤编号：149

特异性/灵敏度

CD16/CD32 (2.4G2) Rat mAb (IF Formulated) 可检测 CD16/CD32 总蛋白的内源水平。该抗体可检测胞外结构域内的表位，并且预计可检测 CD16 和 CD32 的所有同工型。对 5XFAD 小鼠脑细胞进行染色时，观察到小胶质细胞和星形胶质细胞染色。

物种反应性：

小鼠

来源/纯化

通过亲和色谱从组织培养上清液纯化这种单克隆抗体。

背景

CD64 (FcgammaRI)、CD32 (FcgammaRII) 和 CD16 (FcgammaRIII) 是免疫球蛋白超家族的三大类。CD64 对含有三个 Ig 样结构域的 IgG 具有较高的亲和性，而 CD32 和 CD16 与具有两个 Ig 样结构域的 IgG 具有较低的亲和性。两种基因编码 CD16-A 和 CD16-B，导致它们仅在胞外域中存在 6 氨基酸差异。但 CD16-A 具有一个跨膜锚点，而 CD16-B 则具有一个糖基磷脂酰肌醇 (1)。CD64、CD32 和 CD16 是膜糖蛋白，在所有免疫活性细胞中表达，并且可引发不同的免疫功能（激活 B 细胞、吞噬作用、抗体依赖性细胞毒性、免疫复合体清除以及抗原呈递增强）(2)。CD16 交联会诱导 NK 细胞中 Lck 的酪氨酸磷酸化 (Tyr394) (3)。与 CD16 相对比的 CD32 在胞质域中具有酪氨酸激活基序，可结合加工这些基序的分子 (1)。

CD16 和 CD32 在脑中的小胶质细胞上表达 (4)。

有限使用

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