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87960
CD23 (E1R4G) Rabbit mAb
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R
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CD23 (E1R4G) Rabbit mAb #87960

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筛选器：
  1. IHC
使用 CD23 (E1R4G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人非霍奇金氏淋巴瘤组织进行免疫组织化学分析。

使用 CD23 (E1R4G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人唾液腺小细胞癌组织进行免疫组织化学分析。

使用 CD23 (E1R4G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人 B 细胞非霍奇金氏淋巴瘤组织进行免疫组织化学分析。
使用 CD23 (E1R4G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人正常淋巴结组织进行免疫组织化学分析。
与浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（右图）比较，使用 CD23 (E1R4G) Rabbit mAb（左图）对石蜡包埋的人正常脾脏组织进行免疫组织化学分析。
使用 CD23 (E1R4G) Rabbit mAb 对石蜡包埋的 HDLM-2 细胞沉淀物（左图，阳性）或 NCI-H146 细胞沉淀物（右图，阴性）进行免疫组织化学分析。
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Carrier-Free Bulk & Custom Formulation

支持性数据

反应性 H
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 兔 IgG

应用关键词：

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词：

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
免疫组织化学（石蜡） 1:800 - 1:3200

保存

在 10 mM HEPES 钠 (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中供应。-20℃ 保存。切勿分装抗体。‭

有关此产品的无载体（无 BSA 和无叠氮化物）版本，请参阅产品 #89186。

实验步骤

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免疫组织化学（石蜡）

A. 溶液与试剂

注：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 二甲苯。
  2. 无水变性乙醇，组织级（100% 和 95%）。
  3. 去离子水 (dH2O)。
  4. 苏木精（可选）。
  5. 洗涤缓冲液：
    1. 含 Tween® 20 (TBST) 的 1X Tris 盐缓冲液：要制备 1L 1X TBST，添加 100 ml 含 Tween® 20 的 10 X Tris 盐缓冲液 (#9997) 至 900 ml dH20 中并混合。
  6. SignalStain® Antibody Diluent (#8112)。
  7. 1X 柠檬酸盐修复液：要制备 250 mL 的 1X 柠檬酸盐修复液，将 25 ml 的 SignalStain® Citrate Unmasking Solution (10X) (#14746) 稀释到 225 mL 的 dH2O 中。
  8. 3% 过氧化氢：要制备 100 ml，添加 10 ml 30% H2O2 至 90 ml dH2O 中。
  9. 封闭液：TBST/5% Normal Goat Serum 或 1X Animal-Free Blocking Solution。
    1. TBST/5% Normal Goat Serum：要制备 5 ml 1X TBST，添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution：要制备 4 mL of dH2O，添加 1 ml 的 Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019)。
  10. 检测系统：SignalStain® Boost IHC Detection Reagents (HRP, Rabbit #8114)。
  11. 底物：SignalStain® DAB Substrate Kit (#8059)。
  12. 苏木精： Hematoxylin (#14166)。
  13. 封片剂： SignalStain® Mounting Medium (#84583)。

B. 脱蜡/复水

注意：在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。

  1. 脱蜡/水化合步骤：
    1. 将切片放入二甲苯的洗液中孵育 3 次，每次 5 分钟。
    2. 将切片放入 100% 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 分钟。
    3. 将切片放入 95% 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 分钟。
  2. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

C. 抗原修复

对于柠檬酸盐：将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液，再放入微波炉中加热直至沸腾；继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。

D. 染色

  1. 用 dH2O 清洗切片三次，每次 5 分钟。
  2. 切片放入 3 % 过氧化氢水溶液中，孵育 10 分钟。
  3. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
  4. 用洗涤缓冲液清洗切片持续 5 分钟。
  5. 使用 100–400 µl 封闭液将每张切片在室温下封闭 1 小时。
  6. 去除封闭液，并给每块切片添加 100–400 µl 在 SignalStain® Antibody Diluent (#8112) 中稀释过的一抗。4°C 孵育过夜。
  7. 使 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Rabbit #8114) 平衡至室温。
  8. 清除抗体溶液，用洗涤缓冲液清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
  9. 根据需要在切片上滴 1–3 滴 SignalStain® Boost Detection Reagent (HRP, Rabbit #8114)。在加湿箱中室温孵育 30 分钟。
  10. 用洗涤缓冲液清洗切片 3 次，每次 5 分钟。
  11. 加入 1 滴 (30 µl) SignalStain® DAB Chromogen Concentrate 至 1 ml 的 SignalStain® DAB Diluent 中，使用前充分混合。
  12. 在每张切片上应用 100–400 µl SignalStain® DAB，并密切观察，通常 1–10 分钟即可得到合适的染色强度。
  13. 将切片浸入 dH2O 中。
  14. 如果需要，使用 hematoxylin (#14166) 复染切片。
  15. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。
  16. 使切片脱水：
    1. 在 95% 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 秒。
    2. 在 100% 乙醇中重复孵育 2 次，每次 10 秒。
    3. 在二甲苯中重复孵育 2 次，每次 10 秒。
  17. 使用盖玻片和封片剂 (#84583) 封片。

检测试剂/底物兼容性
推荐的
检测试剂		 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Rabbit) #8114 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Rabbit) #18653
兼容的
色原		 SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632 SignalStain® Ultra Blue Alkaline Phosphatase Substrate Kit #12824
SignalStain® Deep Black Peroxidase Substrate Kit #72986  
SignalStain® Radiant Yellow Peroxidase Substrate Kit #69644  

注意：使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗，考虑到检测试剂的不同灵敏度。


发布​时间 2010 年 2 月

修订时间 2020 年 6 月

实验步骤编号：283

特异性/灵敏度

CD23 (E1R4G) Rabbit mAb 可识别内源水平的 CD23 总蛋白。

物种反应性：

人

来源/纯化

使用与人 CD23 蛋白的 Ala118 周围残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

CD23，也称为 FcεRII，是钙依赖性（C 型）凝集素家族的三聚体 II 型跨膜糖蛋白成员 (1)。CD23 在 B 淋巴细胞与 T 淋巴细胞、单核细胞、多形核白细胞、滤泡树突细胞、肠上皮细胞和骨髓基质细胞中表达 (2-8)。最初将 CD23 鉴定为 IgE 的低亲和力受体，而膜结合型 CD23 的接合导致 IgE 产生受 B 淋巴细胞抑制 (9)。CD23 可以经裂解以形成一种可溶性蛋白，其驱动细胞因子在单核细胞中释放、一氧化氮 (NO) 产生以及环腺苷 3'5'-单磷酸 (cAMP) 合成 (10)。可溶性 CD23 通过整合素发送信号，激活 MAPK 通路和 NF-κB 通路 (11)。CD23 是肿瘤疾病预后的有用标志物，在多种自身免疫病症和炎症病症中升高，并且正在作为 IgE 介导的过敏、关节炎和 B 细胞慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 的治疗靶标加以研究 (12)。

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