反应性 | H |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 25-35 |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
人
使用与人颗粒酶 H 蛋白中 Gln195 周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
粒酶属于由细胞毒 T 淋巴细胞和天然杀伤 (NK) 细胞表达的丝氨酸蛋白酶家族,并且是对病原体和转化细胞作出免疫应答的关键组分 (1)。粒酶作为酶原被合成并且通过剪切前导序列加工为成熟酶。它们通过胞吐作用在含有穿孔素(一种膜孔形成蛋白)的溶酶体样颗粒中被释放。粒酶 B 凋亡活性是所有粒酶中最强的,原因在于它能发挥胱天蛋白酶样的作用,在天冬氨酸残基处剪切底物,进而直接激活胱天蛋白酶原并且剪切下游 caspase 底物 (2,3)。
颗粒酶 H 具有糜蛋白酶样硫代酸酯活性,偏好 P1 位点上的疏水性的芳香族氨基酸残基,例如苯基丙氨酸、酪氨酸或蛋氨酸 (4,5)。颗粒酶 H 主要在自然杀伤细胞中高水平表达,但不在 T 淋巴细胞中表达,另外还在肥大细胞中被发现 (6-8)。在穿孔素的介导下进入靶细胞后,颗粒酶 H 会诱导程序性细胞死亡的许多标志,例如线粒体去极化、活性氧类生成、DNA 降解和染色质凝聚 (9,10)。
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