反应性 | H |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 100, 75 |
来源/同种型 | 小鼠 IgG1 |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫荧光法(免疫细胞化学) | 1:200 |
蛋白质印迹法就是将膜与 5% w/v 脱脂奶粉、1X TBS 以及 0.1% Tween® 20 中的稀释的一抗在 4°C 下进行夜间孵育,同时轻轻晃动。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:19
若想获得高质量的免疫荧光图片,请使用我们 #12727 Immunofluorescence Application Solutions Kit 中高效且划算的预制试剂。
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
建议使用荧光物质标记的 Anti-Mouse 二抗:
注意:细胞应当在多孔板、腔室玻片或盖玻片上直接培养、处理、固定和染色。
吸干液体,随后在细胞上覆盖一层 2–3 mm 用 1X PBS 稀释的 4% 甲醛。
注意:甲醛有毒性,需在通风橱中使用。
注意:所有随后的孵育都应当在室温下完成,除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育,以防止干燥和荧光物质淬灭。
发布时间 2006 年 11 月
修订时间 2013 年 11 月
实验步骤编号:148
人
使用与人 KAP-1 蛋白的羧基末端具有特异性的重组蛋白,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
KAP-1 是 TIF1(转录中间因子 1)家族的成员,这个家族是在发育和分化中发挥关键作用的一组转录调节分子。这个家族的成员有两个保守基序(一个氨基末端 的RING-B 盒卷曲螺旋基序和一个羧基末端 PHD 指状结构)和溴结构域单元 (1,2)。KAP-1 是一种含 KRAB(Kruppel 相关盒)结构域的锌指蛋白的辅阻遏蛋白。包含 KRAB 结构域的锌指蛋白是一个大转录因子亚家族,具有脊椎动物细胞特异性,其在不同物种中的表达模式有所不同,并且被认为能调节控制物种形成的基因转录程序 (3,4)。已证实 KAP-1 对早期胚胎发育和精子形成至关重要 (6,5)。在环境或发育信号的刺激下,它通过染色质重构和组蛋白修饰激活或抑制转录。召集 KAP-1 及其与异染色质蛋白 (HP1) 缔合对转录抑制以及历经 F9 胚胎癌细胞分化的进展非常重要 (6,7)。KAP-1 还在 DNA 损伤应答中发挥作用。KAP-1 响应于基因毒性应激在 Ser824 上磷酸化以 ATM 依赖方式发生,并且被认为对染色质松弛非常重要,这反过来又是 DNA 损伤应答所必需 (8)。
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