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4767
NF-κB p65 Antibody Sampler Kit
一抗
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NF-κB p65 Antibody Sampler Kit #4767

引用 (23)
使用 Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb #3033 对经过 hTNF-α（20 ng/mL，5 分钟）处理的 HeLa 细胞的裂解物 (1.0 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的单一靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
Immunoprecipitation of Phospho-NF-κB p65 (Ser536) from HeLa extracts treated with hTNF-α #8902 (20 ng/ml, 5 min). Lane 1 is 10% input, lane 2 is Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900, and lane 3 is Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb. Western blot analysis was performed using Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb. Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
对 HeLa 细胞提取物的 NF-kB p65 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 用 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415 进行沉淀，泳道 3 为 NF-κB p65 (L8F6) Mouse mAb #6956。使用 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb #8242 进行蛋白质印迹法分析。

对 HeLa 细胞提取物的 NF-kB p65 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 用 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415 进行沉淀，泳道 3 为 NF-κB p65 (L8F6) Mouse mAb #6956。使用 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb #8242 进行蛋白质印迹法分析。

使用 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb #8242 对 HeLa 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的单一靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
使用 Acetyl-NF-κB p65 (Lys310) (D2S3J) Rabbit mAb（上）或 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb #8242（下），对 293T 细胞提取物进行蛋白质印迹分析，而 293T 细胞经转染空载 (-) 或使用构建表达 Myc/DDK 标记的人类 NF-κB p65（hNF-κB p65；+）和 HA 标记的人类 p300（hp300-HA；+）进行转染。
使用 Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb（上）或 NF-κB p65 Antibody #3034（下）对 HeLa 细胞和 NIH/3T3 细胞（未处理或 TNF-α 处理（#2169，20 ng/ml 5 分钟））的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 Phospho-NF-kappaB p65 (Ser468) Antibody（顶部）或 NF-kappaB p65 Antibody #3034（底部）对来自 HeLa 细胞（用 TNF-α #2169 (20 ng/ml)、Calyculin A #9902 (50 nM) 或两种化合物处理 5 分钟）的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 NF-κB p65 (L8F6) Mouse mAb #6956（上图）或 β-actin (13E5) Rabbit mAb #4970 （下图）对对照 HeLa 细胞（泳道 1） 或 NF-κB p65 敲除型 HeLa 细胞（泳道 2）的提取物进行蛋白质印迹法分析。NF-κB p65 敲除型 HeLa 细胞中没有信号，这证实了该抗体对 NF-κB p65 的特异性。
以浓度匹配的 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415（虚线）作为对照，使用 NF-kB p65 (L8F6) Mouse mAb（实线）对 MCF7 细胞进行流式细胞分析。Anti-mouse IgG (H+L)，F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4408 作为二抗。
一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO*，它可在酶催化的分解期间发光。
使用 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 对来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（泳道 2）或 Acetyl-NF-κB p65 (Lys310) (D2S3J) Rabbit mAb（泳道 3），对 293T 细胞的乙酰基 NF-κB p65 (Lys310) 进行免疫沉淀，而 293T 细胞使用 Myc/DDK 标记的人类 NF-κB p65、HA 标记的人类 p300 进行共同转染。泳道 1 是 10% 输入对照。使用 Acetyl-NF-κB p65 (Lys310) (D2S3J) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
使用 Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb（上）和 NF-κB p65 (C22B4) Rabbit mAb #4764（下）对 分化的 THP-1 细胞（用 TPA（#9905，80 nM 24 小时）且使用 1 μg/ml LPS 处理所示时间的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 NF-κB p65 (L8F6) Mouse mAb（上）或 α-Tubulin (11Η10) Rabbit mAb #2125（下）时，对来自 HeLa 细胞（用 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-) 或 SignalSilence® NF-κB p65 siRNA I #6261 (+) 转染）的提取物进行蛋白质印迹分析。NF-κB p65 (L8F6) Mouse mAb 证实 NF-κB p65 表达沉默，而使用 α-Tubulin (11Η10) Rabbit mAb 作为内参对照。
使用 Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb（绿色）对 HeLa 细胞（经血清饥饿（左）或 TNF-α 处理（#8902 按 20 ng/ml 20 分钟，右））进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝已用 Alexa Fluor® phalloidin 555（红色）标记。
使用 NF-κB p65 (L8F6) Mouse mAb 对来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
在 SignalSlide® NF-κB p65 IHC Controls #12873（石蜡包埋的 HCT116 细胞（未处理（左）或用 hTNF-α #8902 处理（右））上使用 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 进行免疫组织化学分析。
使用 Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线），对未经处理（蓝色）或已经过 Human Tumor Necrosis Factor-α (hTNF-α) #8902 和 Calyculin A #9902（20 ng/ml 和 100 nM，15 分钟；绿色）处理的 Hela 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
使用 NF-κB p65 (L8F6) Mouse mAb 对人慢性胆囊炎组织进行免疫组织化学分析。
使用 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人慢性胆囊炎进行免疫组织化学分析。
使用 NF-κB p65 (L8F6) Mouse mAb 对石蜡包埋的 OVCAR8 细胞沉淀物（用 Human Tumor Necrosis Factor-α (hTNF-α) #8902 处理（左）或用 SignalSilence® NF-κB p65 siRNA I #6261 处理（右））进行免疫组织化学分析。
使用 NF-κB p65(D14E12) XP® Rabbit mAb（绿色）对 HT-1080 细胞（未处理（左）或用 hTNF-α #8902 处理（20 ng/ml，20 分钟）（右））进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
使用 NF-κB p65 (L8F6) Mouse mAb 对石蜡包埋的 HeLa 细胞沉淀物（未处理（左）或用 Human Tumor Necrosis Factor-α (hTNF-α) #8902 处理（右））进行免疫组织化学分析。
与浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（红色）相比，使用 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb（蓝色）对 HeLa 细胞进行流式细胞分析。
使用 NF-κB p65 (L8F6) Mouse mAb（绿色）对 HeLa 细胞（未处理（左）或用 Human Tumor Necrosis Factor-α (hTNF-α) #8902 处理（20 ng/mL，20 分钟；右））进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对经 hTNF-α #8902（30 ng/ml，1 小时）处理的 HeLa 细胞中提取的交联染色质，在加入 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 后进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。本图显示整个 IL-8（NFκB 的一个已知靶标基因）范围内的结合作用（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他图）。欲知其他 ChIP-seq 情况，请下载产品说明书。
以浓度匹配的 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415（虚线）作为对照，使用 NF-kB p65 (L8F6) Mouse mAb（实线）对 MCF7 细胞 进行流式细胞分析。使用 Anti-mouse IgG (H+L)， F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4408 作为二抗。
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对经 hTNF-α #8902（30 ng/ml，1 小时）处理的 HeLa 细胞中提取的交联染色质，在加入 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 后进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体4（上图）内的结合，包括 NFκB 的已知靶标基因 IL-8（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对经 Human Tumor Necrosis Factor-α (hTNF-α) #8902（30 ng/ml，1 小时）处理的 HeLa 细胞中提取的交联染色质，在加入 NF-κB p65 (L8F6) Mouse mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human IκBα Promoter Primers #5552、人 IL-8 启动子引物和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对经 hTNF-α #8902（30 ng/ml，1 小时）处理的 Hela 细胞中提取的交联染色质，在加入 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human IκBα Promoter Primers #5552、人 IL-8 启动子引物和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对经 hTNF-α #8902（30 ng/ml，1 小时）处理的 HeLa 细胞和 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN。€‚使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 NF-κB p65 的已知靶基因 LAMC2 内结合（参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图）。
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对经 hTNF-α #8902（30 ng/ml，1 小时）处理的 HeLa 细胞和 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN。€‚使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 1（上图）内结合，包括 NF-κB p65 的已知靶基因 LAMC2（下图）（参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图）。
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对经 hTNF-α #8902（30 ng/ml，1 小时）处理的 HeLa 细胞和 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN。使用人 LAMC2 上游引物和人 ITM2A 下游引物进行实时 PCR 来对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
对 CHO 细胞提取物的 NF-kB p65 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 进行沉淀，泳道 3 为 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb #8242。使用 NF-κB p65 (L8F6) Mouse mAb #6956 进行蛋白质印迹法分析。
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4767T		 1 个试剂盒（5 x 20 微升）

Bulk & Custom Formulation

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb 3033 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
 H M R Hm Mk Pg 65 兔 IgG
Acetyl-NF-κB p65 (Lys310) (D2S3J) Rabbit mAb 12629 20 µl
  • WB
  • IP
 H M 65 兔 IgG
NF-κB p65 (L8F6) Mouse mAb 6956 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
  • ChIP
 H M R Hm Mk Mi B Dg Pg 65 小鼠 IgG2b
NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 8242 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
  • ChIP
  • C&R
 H M R Hm Mk Dg 65 兔 IgG
Phospho-NF-κB p65 (Ser468) Antibody 3039 20 µl
  • WB
  • IP
 H M R 65 兔 
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
 Rab 山羊 
Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody 7076 100 µl
  • WB
 M 马 

产品说明

NF-κB p65 Antibody Sampler Kit 含有检查 NF-κB p65/RelA 在 Ser468 和 Ser536 处磷酸化；Lys310 处乙酰化；和 p65 总水平的试剂。

特异性/灵敏度

总 NF-κB p65 抗体可识别 p65 的内源水平，无论翻译后修饰状态是什么，如磷酸化或乙酰化。仅当在其所示靶标残基处磷酸化时，磷酰-NF-κB p65 抗体才可识别 p65 的内源水平。仅当在 Lys310 处乙酰化时， Acetyl-NF-κB p65 (Lys310) (D2S3J) Rabbit mAb 才可识别 p65 的 转染水平的。

来源/纯化

通过采用与人 NF-κB p65 的羧基末端附近的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生 NF-κB p65 (L8F6) Mouse mAb。通过采用与人 NF-κB p65 蛋白的 Lys310 周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生 Acetyl-NF-κB p65 (Lys310) (D2S3J) Rabbit mAb。通过采用与人 NF-κB p65 的 Glu498 周围的氨基酸相对应的合成肽对兔进行免疫接种来产生 NF-κB p65 Antibody。通过采用与人 NF-κB p65 的所示靶残基周围的氨基酸相对应的合成磷酸肽对兔进行免疫接种来产生磷酸特异性抗体。通过蛋白 A 和肽亲和色谱纯化多克隆抗体。

背景

核转录因子 κB (NF-κB)/Rel 家族的转录因子，在炎症和免疫应答中发挥重要作用 (1,2)。哺乳动物中有五个家族成员：RelA、c-Rel、RelB、NF-κB1 (p105/p50) 和 NF-κB2 (p100/p52)。p105 和 p100 都可由蛋白酶体经蛋白水解处理后，分别产生 p50 和 p52。Rel 蛋白结合 p50 和 p52 形成二聚体，二聚体再结合 DNA，调节转录活动。未刺激细胞中 NF-κB 被 IκB 抑制性蛋白阻隔在细胞浆中 (3-5)。NF-κB 活化剂可诱导 IκB 蛋白的磷酸化，并通过泛素-蛋白酶体通路将其靶标进行快速降解，释放 NF-κB 进入胞核，使其调节基因表达 (6-8)。NIK 和 IKKα (IKK1) 可调节 NF-κB2 (p100) 的磷酸化和加工以产生 p52，后者再转位入胞核 (9-11)。
RelA/p65 是在炎症反应和免疫应答中发挥关键作用的 NF-κB 转录复合体的亚基。该复合体由多种同型二聚和异二聚 Rel 家族成员組合组成，其活性受翻译后修饰（包括磷酸化和乙酰化）调节。p65 经 PKA 和/或 MSK1 在 Ser276 处的磷酸化引起与转录辅激活蛋白 p300/CBP 的相互作用增加以增强转录活性。NF-κB 二聚体与 IκB 的装配以及其 DNA 结合活性和转录活性受到主要靶向 Lys218、Lys221 和 Lys310 的 p300/CBP 乙酰转移酶调节 (12-14)。这一过程与组蛋白去乙酰化酶 (HDACs) 互相调节；某些 HDAC 抑制剂已被证实可激活 NF-κB (12-14)。T 细胞共刺激作用和 Calyculin A 均已被证实可增加 Ser468 磷酸化 (15,16)。IKKβ（但不是 IKKα）和 GSK-3β 均靶向该位点 (16,17)，这似乎具有不涉及 TNF-α 或 IL-1β 刺激后核转位抑制的负向调节作用 (17)。p65 在 Ser536 处的磷酸化调节激活、核定位、蛋白质-蛋白质相互作用、转录活性和凋亡 (18-22)。

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通路

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