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9936
NF-κB Pathway Antibody Sampler Kit
一抗
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NF-κB Pathway Antibody Sampler Kit #9936

引用 (143)
使用 Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb #3033 对经过 hTNF-α（20 ng/mL，5 分钟）处理的 HeLa 细胞的裂解物 (1.0 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的单一靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
Immunoprecipitation of Phospho-NF-κB p65 (Ser536) from HeLa extracts treated with hTNF-α #8902 (20 ng/ml, 5 min). Lane 1 is 10% input, lane 2 is Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900, and lane 3 is Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb. Western blot analysis was performed using Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb. Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074 用作二抗。
使用 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb #8242 对 HeLa 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:10 和 1:50 时的单一靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:10（蓝线）和 1:50（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
使用 IKKα (3G12) Mouse mAb（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图），对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb 对来自 THP-1 细胞（用 TPA（#9905，80 nM 24 小时）分化并用 1 μg/ml LPS 处理所示时间）的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 Phospho-IκBα (Ser32) (14D4) Rabbit mAb #2859（上图）、IκBα (L35A5) Mouse mAb (Amino-terminal Antigen) #4814（中图）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对未经处理或经过 IFNa（#36000，20 ng/ml，5 分钟）处理的各种细胞系提取物进行蛋白质印迹法分析。
使用 Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb（上）或 NF-κB p65 Antibody #3034（下）对 HeLa 细胞和 NIH/3T3 细胞（未处理或 TNF-α 处理（#2169，20 ng/ml 5 分钟））的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 IκBα (L35A5) Mouse mAb (Amino-terminal Antigen) #4814（上图）或 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹法分析。
一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO*，它可在酶催化的分解期间发光。
使用 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 对来自不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 IKKβ (D30C6) Rabbit mAb，对不同细胞系提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 IKKα (3G12) Mouse mAb #11930（上图）或 β-actin (13E5) Rabbit mAb #4970（下图）对 HeLa 细胞提取物（泳道 1）或 IKKα 敲除型 HeLa 细胞（泳道 2）进行蛋白印迹分析。敲除型 HeLa 细胞中没有信号，这证实了抗体对 IKKα 的特异性。
使用 #2697（上图）或 IKKα (D3W6N) Rabbit mAb #61294、IKKβ (D30C6) Rabbit mAb #8943（中图）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图），对未经处理或已经过 TNFa（#16789，20 ng/mL，10 分钟）和 Calyculin A（#9902，100 nM，10 分钟）处理的 HeLa 细胞提取物、对已经过 TPA（#4174，80 nM，16 小时）分化且未经处理和已经过 LPS (#14011，1 μg/ml，1 小时）处理的 THP-1 细胞提取物进行蛋白质印迹法分析。
使用 Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb（上）和 NF-κB p65 (C22B4) Rabbit mAb #4764（下）对 分化的 THP-1 细胞（用 TPA（#9905，80 nM 24 小时）且使用 1 μg/ml LPS 处理所示时间的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 Phospho-IκBα (Ser32/36) (5A5) Mouse mAb #9246（上）和 IκBα (L35A5) Mouse mAb (Amino-terminal Antigen)（下），对用 TPA 分化（#9905，80 nM，24 小时）后再用 1 μg/ml LPS 处理规定时长的 THP-1 细胞提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 IKKβ (D30C6) Rabbit mAb（上）和 GAPDH (14C10) Rabbit mAb #2118（下），对野生型 IKKα (-/-) 和 IKKβ (-/-) 小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 IKKα (3G12) Mouse mAb（绿色），对 HCT116（表达水平高；左）和 IGROV-1（表达水平低；右）进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
使用 Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人胆囊（慢性胆囊炎）进行免疫组织化学分析。
使用 Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb（绿色）对 HeLa 细胞（经血清饥饿（左）或 TNF-α 处理（#8902 按 20 ng/ml 20 分钟，右））进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白丝已用 Alexa Fluor® phalloidin 555（红色）标记。
对 Hela 细胞提取物的 IkBa 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 用 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415 进行沉淀，泳道 3 为 IκBα (L35A5) Mouse mAb (Amino-terminal Antigen)#4814。使用 IκBα Antibody #9242 进行蛋白质印迹。
在 SignalSlide® NF-κB p65 IHC Controls #12873（石蜡包埋的 HCT116 细胞（未处理（左）或用 hTNF-α #8902 处理（右））上使用 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 进行免疫组织化学分析。
使用 Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌（未处理（左）或 λ 磷酸酶处理（右））进行免疫组织化学分析。
使用 Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb（实线）或浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线），对未经处理（蓝色）或已经过 Human Tumor Necrosis Factor-α (hTNF-α) #8902 和 Calyculin A #9902（20 ng/ml 和 100 nM，15 分钟；绿色）处理的 Hela 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 用作二抗。
使用 IκBα (L35A5) Mouse mAb (Amino-terminal Antigen) 对石蜡包埋的人平滑肌瘤进行免疫组织化学分析。
使用 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 对石蜡包埋的人慢性胆囊炎进行免疫组织化学分析。
使用 Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人结肠癌进行免疫组织化学分析，显示其胞质定位。
使用 IκBα (L35A5) Mouse mAb (Amino-terminal Antigen) 对石蜡包埋的人肺癌进行免疫组织化学分析。
使用 NF-κB p65(D14E12) XP® Rabbit mAb（绿色）对 HT-1080 细胞（未处理（左）或用 hTNF-α #8902 处理（20 ng/ml，20 分钟）（右））进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
使用 Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人肺（慢性支气管炎）进行免疫组织化学分析。
使用 IκBα (L35A5) Mouse mAb (Amino-terminal Antigen) 对石蜡包埋的人肾腺癌进行免疫组织化学分析。
与浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（红色）相比，使用 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb（蓝色）对 HeLa 细胞进行流式细胞分析。
在对照肽（左）或 Phospho-IKK-alpha/beta (Ser176/180) Blocking Peptide #1023（右）存在的情况下，使用 Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌进行免疫组织化学分析。
使用 IκBα (L35A5) Mouse mAb (Amino-terminal Antigen)（红色），对未经处理（左）或经 TNF-α 处理（#8902，10 ng/ml，15 分钟，右）的 HeLa 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。蓝色伪彩 = DRAQ5® #4084（DNA 荧光染料）。
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对经 hTNF-α #8902（30 ng/ml，1 小时）处理的 HeLa 细胞中提取的交联染色质，在加入 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 后进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。本图显示整个 IL-8（NFκB 的一个已知靶标基因）范围内的结合作用（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他图）。欲知其他 ChIP-seq 情况，请下载产品说明书。
使用 IKK-α (Ser176/Ser180) phosphate Rabbit mAb 对 THP-1 细胞（未处理（蓝色）和用 TPA 和 LPS 处理（绿色））进行流式细胞分析。使用 Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (PE Conjugate) #8885 作为二抗。
使用IκBα (L35A5) Mouse mAb (Amino-terminal Antigen)（实线）或浓度匹配的 Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control #5415（虚线），对经过 TNF-α（#8902，10 ng/ml，5 分钟；蓝色，阴性）处理或未经处理（绿色，阳性）的 NIH/3T3 细胞进行流式细胞分析。Anti-mouse IgG (H+L)，F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4408 作为二抗。
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对经 hTNF-α #8902（30 ng/ml，1 小时）处理的 HeLa 细胞中提取的交联染色质，在加入 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 后进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体4（上图）内的结合，包括 NFκB 的已知靶标基因 IL-8（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
使用 Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb 对来自 TNF-α 处理和 Calyculin A 处理的 HeLa 细胞和 NIH/3T3 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，对经 hTNF-α #8902（30 ng/ml，1 小时）处理的 Hela 细胞中提取的交联染色质，在加入 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 后进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human IκBα Promoter Primers #5552、人 IL-8 启动子引物和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对经 hTNF-α #8902（30 ng/ml，1 小时）处理的 HeLa 细胞和 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN。€‚使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在 NF-κB p65 的已知靶基因 LAMC2 内结合（参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图）。
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对经 hTNF-α #8902（30 ng/ml，1 小时）处理的 HeLa 细胞和 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 进行 CUT&RUN。€‚使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示在染色体 1（上图）内结合，包括 NF-κB p65 的已知靶基因 LAMC2（下图）（参见包含 CUT&RUN-qPCR 数据的其他结果图）。
使用 CUT&RUN Assay Kit #86652 对经 hTNF-α #8902（30 ng/ml，1 小时）处理的 HeLa 细胞和 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 或 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (CUT&RUN) #66362 进行 CUT&RUN。使用人 LAMC2 上游引物和人 ITM2A 下游引物进行实时 PCR 来对富集的 DNA 进行定量。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
对 CHO 细胞提取物的 NF-kB p65 进行免疫沉淀分析。泳道 1 为 10% input，泳道 2 用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 进行沉淀，泳道 3 为 NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb #8242。使用 NF-κB p65 (L8F6) Mouse mAb #6956 进行蛋白质印迹法分析。
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9936T		 1 个试剂盒（7 x 20 微升）

Bulk & Custom Formulation

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
IKKα (3G12) Mouse mAb 11930 20 µl
  • WB
  • IF
 H Mk 85 小鼠 IgG1
IKKβ (D30C6) Rabbit mAb 8943 20 µl
  • WB
  • IP
 H M R Mk 87 兔 IgG
Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb 2697 20 µl
  • WB
  • IHC
  • F
 H M R Hm Mk 85 IKK-alpha 87 IKK-beta 兔 IgG
Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb 3033 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
 H M R Hm Mk Pg 65 兔 IgG
IκBα (L35A5) Mouse mAb (Amino-terminal Antigen) 4814 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
 H M R Mk B Pg 39 小鼠 IgG1
Phospho-IκBα (Ser32) (14D4) Rabbit mAb 2859 20 µl
  • WB
  • IP
 H M R Mk 40 兔 IgG
NF-κB p65 (D14E12) XP® Rabbit mAb 8242 20 µl
  • WB
  • IP
  • IHC
  • IF
  • F
  • ChIP
  • C&R
 H M R Hm Mk Dg 65 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
 Rab 山羊 
Anti-mouse IgG, HRP-linked Antibody 7076 100 µl
  • WB
 M 马 

产品说明

NF-κB Pathway Antibody Sampler Kit 包含的试剂可检测 NF-κB 通路中关键蛋白的激活状态和总蛋白水平：IKKα、IKKβ、NF-κB p65/RelA 和 IκBα。试剂盒包含够量的一抗和二抗，可针对每种一抗进行 2 次蛋白质印迹实验。

特异性/灵敏度

磷酸化 IKKα/β、磷酸化 NF-κB p65 和磷酸化 IκBα 抗体 可分别识别仅在指定残基上磷酸化的 IKKα/β、p65 和 IκB-α 的内源水平。不与相应生理水平的其他家族成员发生交叉反应。总 IKKα、IKKβ、p65 和 IκBα 抗体可识别各自靶标的内源水平，不受磷酸化状态的影响，不与相应生理水平的其他家族成员发生交叉反应。

来源/纯化

使用人重组蛋白或合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

转录核因子 κB (NF-κB)/Rel 转录因子以失活状态存在于细胞质中，并且能够与抑制性 IκB 蛋白构成复合体。IκBα 在 Ser32 和 Ser36 位点的磷酸化被激活，导致 IκBα 发生泛素介导的蛋白酶体依赖性降解，还会释放活化的 NF-κB 二聚体并使之发生核转位。IκBβ 和 IκBε 的调节类似于 IκBα，但蛋白磷酸化和降解的动力学则慢得多。IκBβ 在 Ser/Thr19 和 Ser23 位点磷酸化，而 IκBε 则在 Ser18 和 Ser22 位点磷酸化。该通道的关键调控步骤涉及高分子量 IkappaB 激酶 (IKK) 复合体激活，复合体由 3 个紧密结合的 IKK 亚基组成。IKKα 和 IKKβ 是该激酶的催化亚基。IKK 的激活依赖于 IKKβ （IKKα 的 176 和 180）激活环中 Ser177 和 Ser181 位点的磷酸化。NF-κB 诱导激酶 (NIK)、TANK 结合激酶 1 (TBK1) 及其同源物 IKKε (IKKi) 能磷酸化并激活 IKKα 和 IKKβ。
哺乳动物中转录因子 NF-κB 家族由 p65/RelA、c-Rel、RelB、NF-κB1 (p105/p50) 和 NF-κB2 (p100/p52) 等 5 种蛋白组成。p105 和 p100 经过蛋白水解加工分别产生 p50 和 p52。p105 在多个位点（Ser922、924、928 和 933）进行 IKK 介导的磷酸化后会通过蛋白水解产生 50 kDa 的活化形式，而 p100 经加工产生 p52 则通过 Ser864 和 Ser868 位点的磷酸化诱导。p50 和 p52 产物会与 Rel 蛋白形成二聚体复合体，复合体随后能够结合 DNA 并调节转录。PKA C 和 MSK1使p65/RelA在Ser276位点的磷酸化可增强转录活性。p65 在 Ser536 位点的磷酸化能够调节激活、胞核定位、蛋白间相互作用和转录活性。PMA 诱导的 NF-κB 转录活性依赖于p65中包含 Ser457、Thr458、Thr464 和 Ser468 等潜在磷酸化位点的区域。GSK-3β造成的Ser468磷酸化会抑制 p65 的基础活性。

通路

探索与本品相关的通路。

有限使用

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