反应性 | H M R Mk |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 24 |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
免疫组织化学(石蜡) | 1:50 |
为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注意:在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。
对于柠檬酸盐:将切片浸入 1 X 柠檬酸盐修复液,再放入微波炉中加热直至沸腾;继续保持亚沸腾温度 10 分钟 (95°-98°C)。在实验台上冷却切片 30 分钟。
推荐的 检测试剂 |
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Rabbit) #8114 | SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (AP, Rabbit) #18653 |
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兼容的 色原 |
SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 | SignalStain® Vibrant Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit #76713 |
SignalStain® Vivid Purple Peroxidase Substrate Kit #96632 | SignalStain® Ultra Blue Alkaline Phosphatase Substrate Kit #12824 | |
SignalStain® Deep Black Peroxidase Substrate Kit #72986 | ||
SignalStain® Radiant Yellow Peroxidase Substrate Kit #69644 |
注意:使用本实验步骤中未指定的检测试剂可能需要进一步优化一抗,考虑到检测试剂的不同灵敏度。
发布时间 2010 年 2 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:283
人, 小鼠, 大鼠, 猴
仓鼠 , 鸡 , 非洲爪蟾蜍, 斑马鱼 , 牛 , 马, 豚鼠
使用与人 MOB1 蛋白的 Thr35 周围残基相对应的合成磷酸肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
MOB1 最早被确定为酵母中可结合 Mp 的蛋白,并在有丝分裂完成和倍性维持方面发挥重要作用 (1)。它在果蝇和哺乳动物中的同源物分别为 Mats 和 MOB1,两种同源物与 Hippo 信号转导抑癌基因通路有关,该通路在器官大小调节中发挥关键作用,并与癌症恶化有关 (2-5)。人类中的 MOB1 蛋白有两种形式,即 MOB1A 和 MOB1B,分别通过两种不同的基因编码,但两种基因的氨基酸序列有 95% 的同源性 (6)。两种形式均可结合胞核 Dbf2 相关 (NDR) 激酶的成员,如 LATS1/2 和 NDR1/2,从而刺激激酶活性 (7-9)。MST1 和/或 MST2 在多个苏氨酸残基(例如 Thr12、Thr35)上对 MOB1 的磷酸化可促进此结合 (5,10)。
MST1/2 通过 Thr35 磷酸化稳定 MOB1,增强其与 LATS1 的结合和调节(5)。LATS1 激酶活性的增加促进转录共激活因子 YAP 和 TAZ(11,12)的抑制性磷酸化,导致参与细胞周期进程的基因表达的变化(13)。
探索与本品相关的通路。
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