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12747
SMAD2/3 Antibody Sampler Kit
一抗
抗体小包装组合
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SMAD2/3 Antibody Sampler Kit #12747

引用 (29)
使用 Phospho-SMAD2 (Ser465/467) (138D4) Rabbit mAb #3108 对经 hTGF-β3（10 ng/mL，30 分钟）处理的血清饥饿 HT-1080 细胞的裂解物 (1.0 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道式图像（左图）显示一抗稀释比例为 1:50 和 1:250 时的单一靶标条带（如图所示）。对应的电泳图（右图）为一抗稀释比例在 1:50（蓝线）和 1:250（绿线）时沿毛细血管内分子量的化学发光结果。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
使用 Phospho-SMAD3 (Ser423/425) (C25A9) Rabbit mAb #9520 对经 hTGF-β3（10 ng/mL，30 分钟）处理的血清饥饿的 HT1080 细胞的裂解物 (1 mg/mL) 进行 Simple Western™ 分析。虚拟泳道视图（左图）显示一抗稀释比例为 1:250 时的靶标条带（如图所示）。相应的电泳图视图（右图）描绘了一抗稀释比例为 1:250 时（灰色线）沿毛细血管的按分子量的化学发光。在还原条件下，使用 12-230 kDa 分离模块在 ProteinSimple（BioTechne 品牌）的 Jess™ Simple Western 仪器上进行该实验。
使用 Phospho-SMAD2 (Ser465/467) (138D4) Rabbit mAb（上图）或 SMAD2 Antibody #3102（下图），对未经处理或经 TGF-β 处理的 HeLa 细胞和 NIH/3T3 细胞的提取物进行蛋白质印迹法分析。
使用 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb（上图）和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对来自各种细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。HT-29 和 COLO 205 是确认抗体特异性的 SMAD4 无效型突变细胞系。
使用 Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb #5339（上图）和 α-Actinin (D6F6) XP® Rabbit mAb #6487（下图）对 HeLa 细胞（泳道 1）或 SMAD2 敲除型细胞（泳道 2）的提取物进行蛋白印迹分析。SMAD2 敲除型 HeLa 细胞中没有信号，这证实了抗体对 SMAD2 的特异性。
一抗与靶标蛋白结合之后，与偶联 HRP 的二抗形成复合体。添加 LumiGLO®，在酶催化分解期间发光。
使用 SMAD2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb 对来自 HeLa 细胞和 ACHN 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 Phospho-SMAD3 (Ser423/425) (C25A9) Rabbit mAb #9520（上图）或总的 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb #9523（下图），对未经处理 (-) 或经 TGF-β（10 ng/ml，30 分钟；+）处理的 HT-1080 细胞 、C2C12 细胞或 KNRK 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb #9523（上图）或 β-actin (D6A8) Rabbit mAb #8457（下图）对来自对照 Hela 细胞（泳道 1）或在 SMAD3 编码基因中有明显符合可读框截短突变的 Hela 细胞（泳道 2）的提取物进行蛋白质印迹分析。突变 HeLa 细胞中 SMAD3 分子量的变化与框内缺失一致。
对 HCT 116 细胞提取物的 SMAD4 蛋白进行免疫。泳道 1 为10% 输入，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb。使用 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb 进行蛋白质印迹分析。
使用 Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb 对不同细胞系的提取物进行蛋白质印迹分析。
对 HCT116 细胞提取物的 SMAD2/3 蛋白进行免疫沉淀。泳道 1 为10% 输入，泳道 2 为 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900，泳道 3 为 SMAD2/3 (D7G7) XP®。使用 SMAD2/3 (D7G7) XP® 进行蛋白质印迹分析。Mouse Anti-rabbit IgG (Conformation Specific) (L27A9) mAb #3678 用作二抗。
使用 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb 对来自 HT1080 细胞（人）、C2C12 细胞（小鼠）和 B35（大鼠）细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对经过 TGF-β1 #8915（7 ng/mL，1 小时）处理的 HaCaT 细胞中提取的交联染色质和 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。该图显示了在 SMAD4 的已知靶标基因 ID1 内的结合（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
使用 Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb（绿色）对血清饥饿（左图）或已经 hTGF-β3 #8425 处理（右图）的 NIH/3T3 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 DY-554 Phalloidin 进行标记（红色）。
使用 SMAD2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb（绿色）对血清饥饿（左图）、经 hTGF-β3 #8425（100 ng/ml，30 分钟，中图）处理或经 hTGF-β3 和 SB43152（10 ug/mL，1 小时，右图）处理的 Hela 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。使用 DY-554 phalloidin（红色）标记肌动蛋白纤丝。
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，以经人 TGF-β3 #3706（7 ng/ml，1 小时）处理的 HaCaT 细胞的交联染色质和 Phospho-SMAD3 (Ser423/425) (C25A9) Rabbit mAb #9520 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human CDKN1A Intron 1 Primers #4669、SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers #5139、human c-Myc intron 1 primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
使用 Phospho-SMAD3 (Ser423/425) (C25A9) Rabbit mAb #9520（上图）或总 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb #9523（下图），对经 TGF-β1、TGFR 抑制剂 SB-431542 或 BMP-2 处理的 HT1080 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。
使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，对经过 TGF-β1 #8915（7 ng/mL，1 小时）处理的 HaCaT 细胞中提取的交联染色质和 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® ChIP-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® #56795 制成 DNA 库。该图显示了在染色体 20（上图）内的结合，包括 SMAD4 的已知靶基因 ID1（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
Flow cytometric analysis of HeLa cells using SMAD2 (D43B4) XP® Rabbit mAb (solid line) compared to concentration-matched Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 (dashed line). Anti-rabbit IgG (H+L)、F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #4412 作为二抗。
与浓度匹配的 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900（虚线）比较，使用 SMAD2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb（实线）对 Hela 细胞进行流式细胞分析。Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor®488Conjugate) #4412 用作二抗。
使用 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb（绿色）对未经处理（左图）或经 TGFβ 处理（右图）的 HT1080 细胞进行共聚焦免疫荧光分析。肌动蛋白纤丝用 Alexa Fluor®555 phalloidin（红色）进行标记。
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，以经 TGF-β1 #8915（7 ng/mL，1 小时）处理的 HaCaT 细胞中的交联染色质和 SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers #5139、human JunB promoter primers 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。每份样品的免疫沉淀 DNA 含量使用与染色质输入总量（相当于1）相对应的信号表示。
与非特异阴性对照抗体（红色）比较，使用 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb #9523（蓝色）对 HT-1080 细胞进行流式细胞分析。
Chromatin immunoprecipitations were performed with cross-linked chromatin from HaCaT cells treated with Human TGF-β3 #8425 (7 ng/ml) for 1 h and either Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb #5339 or Normal Rabbit IgG #2729 using SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005. 使用 SimpleChIP® Human CDKN1A Intron 1 Primers #4669、SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers #5139 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，以经 hTGF-β3 #8425（7 ng/ml，1 小时）处理的 HaCaT 细胞中的交联染色质和 SMAD2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示结合作用遍及 ID1（SMAD2/3 的已知靶标基因）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。欲知其他 ChIP-seq 情况，请下载产品说明书。
使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，以经人 TGF-β3 #3706 (7 ng/ml) 处理 1 小时的 HaCaT 细胞的交联染色质和 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示结合作用遍及CDKN1A（ SMAD3 的已知靶标基因）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，以经 hTGF-β3 #8425（7 ng/ml，1 小时）处理的 HaCaT 细胞中的交联染色质和 SMAD2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。结果图显示结合作用遍及第 20号染色体（上图），包括ID1（SMAD2/3 的已知靶基因） （下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，以经人 TGF-β3 #3706 (7 ng/ml) 处理 1 小时的 HaCaT 细胞的交联染色质和 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb 进行染色质免疫沉淀分析。使用 DNA Library Prep Kit for Illumina® (ChIP-seq, CUT&RUN) #56795 制备 DNA 库。该图显示结合作用遍及 6 号染色体（上图），包括 SMAD3 的已知靶标基因 CDKN1A（下图）（参见包含 ChIP-qPCR 数据的其他结果图）。
使用 SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003，以经 hTGF-β3 #8425（7 ng/ml，1 小时）处理的 HaCaT 细胞中的交联染色质和 SMAD2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀分析。使用 SimpleChIP® Human CDKN1A Intron 1 Primers #4669、SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers #5139 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
使用 SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9005，以来自经人 TGF-β3 #3706 (7 ng/ml) 处理 1 小时的 HaCaT 细胞中的交联染色质和 SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb 或 Normal Rabbit IgG #2729 进行染色质免疫沉淀。使用 SimpleChIP® Human CDKN1A Intron 1 Primers #4669、SimpleChIP® Human ID1 Promoter Primers #5139 和 SimpleChIP® Human α Satellite Repeat Primers #4486，通过实时 PCR 对富集的 DNA 进行定量分析。将每份样品中免疫沉淀的 DNA 的量表现为相对于所输入染色质总量（等于 1）的信号。
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To Purchase # 12747T
目录# 规格 价格 库存
12747T		 1 个试剂盒（6 x 20 微升）

Bulk & Custom Formulation

产品包括 数量 应用 反应性 MW (kDa) 同型
Phospho-SMAD2 (Ser465/467) (138D4) Rabbit mAb 3108 20 µl
  • WB
 H M R Mi 60 兔 IgG
SMAD2 (D43B4) XP® Rabbit mAb 5339 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
  • ChIP
 H M R Mk 60 兔 IgG
SMAD2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb 8685 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
  • ChIP
 H M R Mk 52, 60 兔 IgG
Phospho-SMAD3 (Ser423/425) (C25A9) Rabbit mAb 9520 20 µl
  • WB
  • IP
  • ChIP
 H M R 52 兔 IgG
SMAD3 (C67H9) Rabbit mAb 9523 20 µl
  • WB
  • IP
  • IF
  • F
  • ChIP
 H M R Mk 52 兔 IgG
SMAD4 (D3M6U) Rabbit mAb 38454 20 µl
  • WB
  • IP
  • ChIP
 H M R Mk 70 兔 IgG
Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody 7074 100 µl
  • WB
 Rab 山羊 

产品说明

SMAD2/3 Antibody Sampler Kit 提供一种经济合算的方式，可用来检测 TGF-β 信号转导通路的靶标蛋白。该试剂盒包含的抗体足以针对每种一抗进行两次蛋白质印迹实验。

特异性/灵敏度

SMAD2/3 Antibody Sampler Kit 中的每种抗体仅可识别其特定靶标，且不会与其他家族成员发生交叉反应。激活状态的抗体可检测仅在指定位点磷酸化的特定靶标。SMAD2、SMAD3 与 SMAD4 总抗体可检测其各自内源水平的靶标。

来源/纯化

使用与人 SMAD2 蛋白的 Ser465/467 或人 SMAD3 蛋白的 Ser423/425 周围残基相对应的合成磷酸肽，对动物进行免疫接种来产生磷酸特异性单克隆抗体。使用与小鼠 SMAD2 和 SMAD3 的氨基末端周围残基、人 SMAD2/3 蛋白的 His198 或人 SMAD4 蛋白的 Asp165 周围残基相对应的合成肽，对动物进行免疫接种来产生总的 SMAD2、SMAD3 和 SMAD4 单克隆抗体。

背景

转化生长因子 β (TGF-β) 超家族信号转导在众多生物系统中对细胞生长、分化和发育的调节发挥重要作用。一般而言，信号转导起始于配体诱导的丝氨酸/苏氨酸受体激酶的寡聚化和胞浆信号转导分子的磷酸化，这些信号转导分子在 TGF-β/活化素通路中是 Smad2 和 Smad3，而在骨形态发生蛋白 (BMP) 通路中则是 Smad1/5/8。Smad 蛋白的羧基末端被活化受体磷酸化后，导致其与常见信号转导因子 Smad4 结合，并转位入胞核。被激活的 Smad 蛋白可通过与转录因子结合，调节各种不同的生物学效应，造成细胞状态特异性的转录调节 (1-4)。

有限使用

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