反应性 | H |
灵敏度 | 内源性 |
MW (kDa) | 12、45-60 |
来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
应用 | 稀释度 |
---|---|
蛋白质印迹法 | 1:1000 |
为了进行蛋白质印迹,在 4°C 将膜与 5% w/v BSA、1X TBS、0.1% Tween® 20 中稀释的一抗孵育过夜,同时柔和振摇。
注意:请参阅一抗产品网页了解推荐的抗体稀释度。
从样品制备至检测,进行蛋白质印迹所需要的试剂现归于一个便利的试剂盒:#12957 Western Blotting Application Solutions Kit
注:使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
上样 20 µl 到 SDS-PAGE 凝胶 (10 cm x 10 cm) 上。
注意:建议将预染蛋白分子量标准品(#59329,10 µl/泳道)上样,以验证转膜的效率,生物素化蛋白质标准品(#7727,10 µl/泳道)可以直接在膜上显出条带以确定分子量。
注意:体积适用于 10 cm x 10 cm (100 cm2) 的膜;对于不同尺寸的膜,可相应调整体积。
* 避免反复接触皮肤。
发布时间 2005 年 6 月
修订时间 2020 年 6 月
实验步骤编号:10
人
小鼠, 大鼠, 猪
使用与人 TGF-β1 蛋白的羧基末端区域残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
转化生长因子-β (TGF-β) 蛋白属于 TGF-β 超家族细胞因子,在调节细胞增殖和分化、发育模式和形态发生以及疾病发病机制中发挥关键作用 (1-3)。TGF-β 配体通过以下三种细胞表面受体引发信号转导:I 型 (RI)、II 型 (RII) 和 III 型 (RIII) TGF-β 受体。I 型和 II 型受体是丝氨酸/苏氨酸激酶,在配体与 II 型受体结合后形成异聚复合体。为了应对配体结合,II 型受体与 I 型受体形成稳定的复合体,从而触发 I 型受体的磷酸化和激活 (4)。这导致受体介导的 SMAD(SMAD2、SMAD3)的募集,其被 C 末端 SSXS 结构域中的 I 型激酶磷酸化。这导致 co-SMAD (SMAD4) 的募集,以及随后将这种异聚 SMAD 复合体移位到胞核,从而调节靶标基因的转录 (5-7)。III 型受体(也称为 β 聚糖),是一种跨膜蛋白聚糖,具有大的细胞外结构域,以高亲和力结合 TGF-β,但缺乏细胞质信号转导结构域。III 型受体的表达可以通过向信号转导复合体呈递配体来调节 TGF-β 信号转导 (8)。
TGF-β 有三种同工型,依次称作 TGF-β1、TGF-β2 和 TGF-β3,分别由不同基因编码并以组织特异性方式表达 (10)。每种同工型皆以一种较大的前体蛋白形式合成,它们包含有前肽区域,在蛋白分泌之前去除该区域。成熟的 TGF-β 包含有由二硫键连接的两种多肽,可形成大约 25 kDa 的蛋白。
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