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90840
TMEM119 (E3E1O) Rabbit mAb
一抗
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R
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TMEM119 (E3E1O) Rabbit mAb #90840

引用 (12)
筛选器：
  1. IF
使用 TMEM119 (E3E1O) Rabbit mAb（绿色）对野生型小鼠脑（左）和肝脏（右）进行共聚焦免疫荧光分析。切片用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封装。
对阿尔茨海默病淀粉样蛋白小鼠模型的大脑进行共聚焦免疫荧光分析。切片用 TMEM119 (E3E1O) Rabbit mAb（绿色）和 GFAP (GA5) Mouse mAb #3670（黄色）标记。使用 Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control #3900 封闭游离二级结合位点后，用 β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #42284（红色）对斑块染色。切片用 ProLong® Gold Antifade Reagent with DAPI #8961（蓝色）封装。
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Carrier-Free Bulk & Custom Formulation

支持性数据

反应性 M
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 兔 IgG

应用关键词：

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词：

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品使用信息

应用 稀释度
免疫荧光法（冰冻） 1:200 - 1:400

保存

保存在 10 mM sodium HEPES (pH 7.5)、150 mM NaCl、100 µg/ml BSA、50% 甘油和低于 0.02% 的叠氮化钠中。-20℃ 保存。切勿分装抗体。‭

有关此产品的无载体（无 BSA 和无叠氮化物）版本，请参阅产品 #35380。

实验步骤

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免疫荧光法（冰冻）

A. 溶液与试剂

注：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 20 X 磷酸盐缓冲液 (PBS)： (9808) 要制备 1L 1X PBS：添加 50 ml 20X PBS 至 950 ml dH2O 中并混合。调节 pH 至 8.0。
  2. 甲醛：16%，无甲醇，Polysciences 公司生产。（cat# 18814），使用新鲜制剂，小瓶打开后在 4°C 避光保存，同时在 1X PBS 中稀释使用。
  3. 封闭缓冲液：（1X PBS / 5% 常规血清/ 0.3% Triton™ X-100）：要制备 10 ml，添加 0.5 ml 与二抗同一物种来源的正常血清（例如 Normal Goat Serum (#5425) 添加至 9.5 ml 1X PBS）并充分混合。搅拌时加入 30 µl Triton™ X-100。
  4. 抗体稀释缓冲液： (1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton™ X-100)：要制备 10 ml，添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中。充分混合后，添加 0.1 g BSA (#9998)，并混合。

  5. 建议使用偶联荧光素的抗兔二抗：

    注意：首次使用一抗或荧光物质标记的二抗时，用滴定法检测抗体，以确定哪种稀释度会在最低的背景下为您的样品产生最强的特定信号。

  6. Prolong® Gold AntiFade Reagent (#9071)，Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI (#8961)。

B. 样品制备 - 冰冻/恒冷箱切片 (IF-F)

  1. 冰冻固定组织进行免疫染色（C 部分）。
  2. 对新鲜未固定的冰冻组织，请立刻按下列步骤固定：

    1. 切片用 1X PBS 中稀释的 4% 甲醛浸没。

      注意：甲醛有毒性，仅可在通风橱中使用。

    2. 室温下固定切片 15 分钟。
    3. 吸干液体后用 1X PBS 冲洗三次，每次 5 分钟。
    4. 继续进行免疫染色操作（C 部分）。

C. 免疫染色

注意：所有随后的孵育都应当在室温下完成，除非另有注明需要在避光湿盒或带盖的培养皿/板中孵育，以防止干燥和荧光物质淬灭。

  1. 在封闭缓冲液中封闭标本 60 分钟。
  2. 封闭标本时，按照产品网页实验步骤中推荐的稀释比例，在抗体稀释缓冲液中配制一抗。
  3. 吸去封闭缓冲液，加入稀释后的一抗。
  4. 4°C 孵育过夜。
  5. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  6. 用抗体稀释缓冲液将荧光物质标记的二抗稀释后，室温下避光孵育标本 1–2 小时。
  7. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
  8. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent (#9071) 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI (#8961) ，用盖玻片盖住切片。
  9. 要达到最佳效果，使用封片液室温过夜。将切片平放避光 4°C 环境下，可长期保存。

发布​时间 2006 年 11 月

修订时间 2016 年 7 月

实验步骤编号：151

特异性/灵敏度

TMEM119 (E3E1O) Rabbit mAb 可识别内源水平的 TMEM119 总蛋白。

物种反应性：

小鼠

Species predicted to react based on 100% sequence homology

人

来源/纯化

通过采用与人 TMEM119 蛋白氨基末端周围的残基相对应的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

跨膜蛋白119 (TMEM119) 是功能未知的细胞表面蛋白，仅由髓系和神经细胞的小胶质细胞亚群表达 (1)。具有分支和变形虫形态的 Iba1+小胶质细胞表达 TMEM119，而 Iba1+巨噬细胞为 TMEM119 阴性 (2)。TMEM119 和其他稳态基因已被证明在疾病相关小胶质细胞 (DAM) 中下调。这些 DAM 小胶质细胞在人和小鼠中均是保守的，并已在阿尔茨海默病 (AD)、肌萎缩性侧索硬化症 (ALS) 以及 5XFAD 和 APP/PS1小鼠模型中发现。作为小胶质细胞标记物，这种蛋白质的特异性已被证明对于标记健康组织中的小胶质细胞以及将其从神经退行性疾病模型中浸润巨噬细胞和其他细胞类型中分辨出来具有重要意义 (1,2)。

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