与传统抗体相比，重组抗体具有几个关键优势。这些包括良好的批次间一致性，持续供应以及对抗体工程的适应性。因此，重组抗体在科学研究中的应用日益广泛，特别是作为解决持续存在的可重复性难题的一种手段。
传统的多克隆和单克隆抗体是正常 B 细胞发育和基因重组的产物。它们是通过用抗原免疫动物以引发免疫应答而产生的。多克隆抗体由许多不同的 B 细胞克隆分泌并识别多个抗原表位，而单克隆抗体则来自单个 B 细胞克隆，并且仅对单个表位具有特异性。
重组抗体是单克隆抗体，但是其生产涉及体外基因操作。将抗体基因克隆到表达载体中后，将其转染到合适的宿主细胞系中进行抗体表达。哺乳动物细胞系最常用于重组抗体的生产，然而细菌、酵母或昆虫来源的细胞系也适用。
由于重组抗体的生产涉及对抗体轻链和重链进行测序，因此这是一个高度可控且可靠的过程。相反，用于生产单克隆抗体的基于杂交瘤的系统容易发生遗传漂移和不稳定，从而增加了批次间变异或抗体表达缺失的可能性。重组抗体在批次之间高度一致，从而确保了可重复的实验结果。
体外生产抗体的方法适合大规模生产，这意味着抗体的可获得性不太可能成为限制因素。此外，由于重组抗体序列是已知的，因此确保了供应的连续性；如需将抗体用于大规模长期研究，这可能就是一个至关重要的因素。
与传统的抗体生产方法不同，重组方法避免了使用动物的需要。多克隆抗体直接从免疫宿主血清中纯化，单克隆抗体从杂交瘤来源的组织培养上清液 (TCS) 或腹水中纯化，而重组抗体是从转染宿主细胞系的 TCS 中纯化。无论抗体是多克隆抗体、单克隆抗体还是重组抗体，在实验使用前都必须在预期应用中对其进行适当验证。在CST，我们遵守抗体验证标志，即在任何特定实验方法中的确定抗体特异性、敏感性和功能性的六个互补策略。通过针对每种抗体产品精心定制这些策略，我们保证 CST 抗体的适用性，以帮助您获得可信赖的结果。
| 反应性 | All |
| 灵敏度 | 转染性 |
| MW (kDa) | |
| 来源/同种型 | 兔 IgG |
产品信息
This Cell Signaling Technology® F(ab’)2 fragment lacks an Fc domain, and will not exhibit reactivity with human Fc receptors. This eliminates the need for Fc blocking and reduces false positives in assays containing human monocytes or other cells with high expression of Fc receptors.
The F(ab')2 fragment is generated by enzymatic digestion of the full-length IgG clone coupled with chromatography to remove both the Fc fragment and the intact IgG. The F(ab’) fragment is conjugated to Alexa Fluor® 488 fluorescent dye under optimal conditions.
| 应用 | 稀释度 |
|---|---|
| 流式细胞术（活性） | 1:50 |
注：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。
注：在您的实验中加入荧光细胞染料（包括活力指示染料、DNA 染料等）时，请参考染料产品网页，了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com，了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。
注：使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。
注：如果使用全血，则需裂解红血细胞，并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。
注：人 Fc 受体与兔 IgG 发生交叉反应。当感兴趣的细胞表达高水平的 Fc 受体蛋白（例如，巨噬细胞/单核细胞谱系）时，在用兔抗体进行免疫染色之前，用人 Fc 块预孵育活细胞。
注：最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般，1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。
发布时间 2017 年 6 月
修订时间 2022 年 1 月
实验步骤编号：1504
预期的所有物种
使用含有三个 Gly4Ser 重复序列的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
聚甘氨酸-丝氨酸 (G4S) 接头是一种灵活的非结构化合成肽接头序列，通常用于连接单链可变片段 (scFv) 的可变重 (VH) 域和可变轻 (VL) 域以及利用识别靶抗原的胞外域 scFv 的嵌合抗原受体 (CAR)。接头本身由核心五肽序列 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser 组成，该序列在基于 scFv 的 CAR 和 scFv 片段中重复并通常以 15 聚体 (G4S) 3或 20 聚体 (G4S) 4的形式存在。接头序列的长度在控制 scFv 稳定性以及 VH 和 VL 结构域之间的非共价结合方面发挥作用 (1,2)。
Human Fc receptors exhibit strong cross-reactivity with rabbit IgG, and are expressed at high levels on cells of myeloid lineage (e.g., monocytes and myeloid-derived cell lines). Fluorescent anti-linker F(ab')2 fragment conjugates are ideal for use in flow cytometry assays on cells containing Fc receptors, and eliminate the need for an Fc blocking step prior to antibody incubation.
Cell Signaling Technology employs strict quality control procedures to ensure that each conjugate provides optimal specificity and fluorescence.
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