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17399
G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb (PE-Cy®7 Conjugate)
抗体偶联物
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G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb (PE-Cy®7 Conjugate) #17399

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筛选器：
  1. F
Flow cytometric analysis of live Jurkat cells (blue, negative) or Jurkat cells engineered to stably express an scFv-based Anti-CD20 CAR containing a G4S linker (green, positive) using G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb (PE-Cy®7 Conjugate) (solid lines) or concentration-matched Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (PE-Cy®7 Conjugate) #97492 (dashed lines). 细胞系由匹兹堡大学 Lohmueller 实验室提供。
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支持性数据

反应性 All
灵敏度 转染性
MW (kDa)
来源/同种型 兔 IgG

应用关键词：

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词：

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品说明

This Cell Signaling Technology® antibody is conjugated to phycoerythrin in combination with cyanine 7 (PE-Cy®7) under optimal conditions. 该抗体偶联物的反应性预计与非偶联的 G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb #71645 相同，后者预计将与细胞表面表达的具有不同特异性的 CAR 反应，该 CAR 在细胞外结构域的 scFv 内含有 G4S 连接蛋白。

产品使用信息

应用 稀释度
流式细胞术（活性） 1:50

保存

保存在 PBS (pH 为7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。4°C 保存。切勿分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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流式细胞术，针对直接结合抗体的活细胞实验步骤

A. 溶液与试剂

注：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 1 X 磷酸盐缓冲生理盐水 (PBS)：要配制 1 L 1X PBS：将 100 ml 10X PBS (#12528) 添加到 900 ml 水，混合。
  2. 抗体稀释缓冲液：购买即用型流式细胞术抗体稀释缓冲液 (#13616)，或在 100 ml 1x PBS 中溶解 0.5 g 牛血清白蛋白 (BSA) (#9998) 来配制 0.5 % BSA PBS 缓冲液。4°C 保存。

注：在您的实验中加入荧光细胞染料（包括活力指示染料、DNA 染料等）时，请参考染料产品网页，了解建议的实验步骤。访问 www.cellsignal.com，了解经验证用于流式细胞术的细胞染料完整列表。

B. 免疫染色

注：使用血细胞计数器或备选方法计数细胞。

注：如果使用全血，则需裂解红血细胞，并在免疫染色之前通过离心分离洗涤。

注：人 Fc 受体与兔 IgG 发生交叉反应。当感兴趣的细胞表达高水平的 Fc 受体蛋白（例如，巨噬细胞/单核细胞谱系）时，在用兔抗体进行免疫染色之前，用人 Fc 块预孵育活细胞。

注：最佳离心条件会根据细胞类型和试剂容量变动。一般，1-5 分钟 150-300g 将足以使细胞沉淀下来。

  1. 将所需数目的细胞分装入试管或小孔中。（通常，每次测定 5 x 105 至 1 x 106 个细胞。）
  2. 通过离心使细胞沉淀下来，移除上清液。
  3. 在 100 µl 稀释的一抗中重悬细胞，这种一抗按建议的稀释度或如通过滴定所确定那样以抗体稀释缓冲液配制。
  4. 在冰上孵育 30 分钟至 1 小时。避光。
  5. 用抗体稀释缓冲液进行离心洗涤。弃去上清液。重复。
  6. 在 200-500 μl 抗体稀释缓冲液中重悬细胞后用流式细胞分析仪进行分析。

发布​时间 2017 年 6 月

修订时间 2022 年 1 月

实验步骤编号：1504

特异性/灵敏度

G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb (PE-Cy®7 Conjugate) recognizes exogenously expressed levels of scFv-based CARs containing a G4S linker.

物种反应性：

预期的所有物种

来源/纯化

使用含有三个 Gly4Ser 重复序列的合成肽对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

聚甘氨酸-丝氨酸 (G4S) 接头是一种灵活的非结构化合成肽接头序列，通常用于连接单链可变片段 (scFv) 的可变重 (VH) 域和可变轻 (VL) 域以及利用识别靶抗原的胞外域 scFv 的嵌合抗原受体 (CAR)。接头本身由核心五肽序列 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser 组成，该序列在基于 scFv 的 CAR 和 scFv 片段中重复并通常以 15 聚体 (G4S) 3或 20 聚体 (G4S) 4的形式存在。接头序列的长度在控制 scFv 稳定性以及 VH 和 VL 结构域之间的非共价结合方面发挥作用 (1,2)。

有限使用

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