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35109
LAG3 (D2G4O) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)
抗体偶联物
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LAG3 (D2G4O) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) #35109

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筛选器：
  1. IHC
Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human tonsil using LAG3 (D2G4O) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) (green) and DAPI #4083 (blue).
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35109S		 100 µl （100 次检测）

Bulk & Custom Formulation

支持性数据

反应性 H
灵敏度 内源性
MW (kDa)
来源/同种型 兔 IgG

应用关键词：

  • WB- 蛋白质印迹法
  • IP-免疫沉淀法
  • IHC-免疫组织化学法
  • ChIP-染色质免疫沉淀法
  • C&R - CUT&RUN
  • C&T - CUT&Tag
  • DB - 点印迹
  • eCLIP - eCLIP
  • IF-免疫荧光法
  • F-流式细胞术

物种交叉反应性关键词：

  • H-人
  • M-小鼠
  • R-大鼠
  • Hm- 仓鼠
  • Mk-猴
  • Vir- 病毒
  • Mi-水貂
  • C-鸡
  • Dm-黑腹果蝇
  • X-爪蟾
  • Z-斑马鱼
  • B-牛
  • DG-犬
  • PG-猪
  • Sc-酿酒酵母
  • Ce-秀丽隐杆线虫
  • Hr-马
  • GP-豚鼠
  • Rab-Rabbit
  • All-预期所有物种

产品说明

Cell Signaling Technology® 的这种抗体在最合适的条件下与 Alexa Fluor® 488 荧光染料偶联。This antibody conjugate is expected to exhibit the same species cross-reactivity as the unconjugated LAG3 (D2G4O) XP® Rabbit mAb #15372.

产品使用信息

应用 稀释度
免疫组织化学（石蜡） 1:50

保存

保存在 PBS (pH 为7.2)、低于 0.1 % 的叠氮化钠和 2 mg/ml BSA 中。4°C 保存。切勿分装抗体。避光保存。切勿冷冻。

实验步骤

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免疫组织化学（石蜡）

A. 溶液与试剂

注意：使用反渗透去离子水 (RODI) 或同等级别的水配制溶液。

  1. 二甲苯。
  2. 乙醇，无水变性，组织学分级（100% 和 95%）。
  3. 去离子水 (dH2O)。
  4. 洗涤缓冲液：
    1. 含 Tween®20 (TBST) 的 1X Tris 盐缓冲液 (TBST)：要配制 1L 1X TBST，添加 100 ml 含 Tween®20 (TBST)(#9997) 的 10 X Tris 盐缓冲液至 900 ml dH20 中，混合。
    2. 1X 磷酸盐缓冲盐水 (PBS)：要配制 1L 1X PBS，添加 100 ml 10X 洗涤缓冲液、磷酸盐缓冲盐水 (#12528) 到 900 ml dH20 中，混合。
  5. SignalStain® Antibody Diluent: (#8112)
  6. 1X EDTA 修复液：要配制 250 mL 1X EDTA 修复液，用 225 ml dH2O 稀释 25 ml SignalStain® EDTA Unmasking Solution (10X) (#14747)。
  7. 3% 过氧化氢：要制备，添加10 ml 30% H2O2至90 ml dH2O 中。
  8. 封闭液：1X TBST/5% Normal Goat Serum 或 1X Animal-Free Blocking Solution。
    1. TBST/5% Normal Goat Serum：要制备 5 ml 1X TBST，添加 250 µl Normal Goat Serum (#5425)。
    2. 1X Animal-Free Blocking Solution：要制备4 mL 的 dH2O，添加 1 ml 的 Animal-Free Blocking Solution (5X) (#15019)。
  9. Prolong® Gold AntiFade Reagent(#9071)、Prolong® Gold AntiFade Reagent with DAPI(#8961)。
  10. （可选）TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher (#92401)。

B. 脱蜡/复水

注意：在制作过程中务必随时保持切片处于湿润状态。

  1. 脱蜡/水化合步骤：
    1. 将切片放入二甲苯的洗液中孵育 3 次，每次 5 分钟。
    2. 将切片放入 100 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 分钟。
    3. 将切片放入 95 乙醇中孵育切片 2 次，每次 10 分钟。
  2. 用 dH2O 清洗切片两次，每次 5 分钟。

C. 抗原修复

  1. 在微波炉中加热浸于 1X EDTA 修复液的切片直至开始沸腾为止；继而在亚沸腾温度 (95°-98°) 持续 15 分钟。无需冷却。

    2. D. 染色

    1. 用 dH2O 清洗切片三次，每次 5 分钟。
    2. 在 1X TBST 中孵育切片 5 分钟。
    3. 在每个切片上滴加 100–400 µl 首选封闭液，在室温下封闭 1 小时。
    4. 移除封闭液，并向每张切片添加稀释于 SignalStain® Antibody Diluent 中的 100-400 µl 一抗。
    5. 在 4°C 过夜孵育。
    6. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟，使其避光。
      注：请参阅下文，了解可选的 TrueBlack® 脂褐素自发荧光淬灭剂实验步骤。
    7. 使用 Prolong® Gold Antifade Reagent 或 Prolong® Gold Antifade Reagent with DAPI，用盖玻片盖住切片。
    8. 要达到最佳效果，使用封片液室温过夜。为长期储存，将切片在 4°C 避光平放储存。

    TrueBlack® 脂褐素自发荧光猝灭剂实验步骤

    按照 D 部分步骤 6：

    重要提示：TrueBlack® 脂褐素自发荧光猝灭剂与去垢剂不兼容。任何涉及去垢剂的步骤必须在施加 TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 之前完成。

    1. 通过在 70% 乙醇中 1:20 稀释来配制 TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 溶液。涡旋混合。注：猝灭液应在用前新鲜配制，且若沉淀物可见则丢弃。我们建议在稀释前将装有 TrueBlack® 脂褐素自发荧光猝灭剂的 20X DMF 原液加热至 70°，以免形成沉淀物。
    2. 立即用 100 µL - 200 µL 猝灭溶液在室温覆盖组织切片 30 秒。重要提示：请勿让切片干透。切片可以耐受更长的孵育（长达 3 分钟），只要它们保持水化即可。
    3. 在转移到 1X PBS 之前，在吸水毛巾上轻拍切片以归集多余 TrueBlack® 脂褐素自发荧光猝灭剂。
    4. 用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分钟。
    5. 继续进行复染/封片。

实验步骤编号：2924

特异性/灵敏度

LAG3 (D2G4O) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate) recognizes endogenous levels of total LAG3 protein.

物种反应性：

人

来源/纯化

使用人 LAG3 蛋白氨基末端特异性重组蛋白，对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。

背景

Lymphocyte activation gene 3 (LAG3, CD223) is an immune checkpoint control protein that negatively regulates T cells and immune responses. Ig 超家族的 CD4-样成员 LAG3 包含一个胞外 IgV、三个 IgC 结构域、一个跨膜结构域和一个较短的胞浆域 (1)。LAG3 主要在激活的 + T 细胞、CD8+ T 细胞、Tregs 和 NK 细胞中表达，在这些细胞中 LAG3 被 MHC II 类分子（唯一已知的配体）激活。虽然最初发现 LAG3 可激活 Treg 细胞 (2)，但 LAG3 也能抑制 CD8+ T 细胞 (3,4)。LAG3 通常与 PD-1 在肿瘤浸润性淋巴细胞表面共表达，两种蛋白质在细胞表面单独起作用，可促进肿瘤介导的免疫抑制 (4,5)。阻滞 LAG3 是一个可喜的肿瘤干预策略 (6)。

有限使用

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Alexa Fluor 是 Life Technologies 公司的注册商标。
XP 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。
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